【摘 要】
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为建立口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western-blotting鉴定蛋白表达和反应原性后,将纯化后的蛋白作为抗原,建立FMDV抗体间接
【基金项目】
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科技创新2030—重大项目课题(2021ZD0113802);
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为建立口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)快速、高效的血清学检测方法,根据GenBank收录的FMDV-O型国内流行株VP1基因(登录号:JN998085.1),构建重组质粒pCold TF-VP1,通过原核表达系统获得VP1蛋白。通过SDS-PAGE和Western-blotting鉴定蛋白表达和反应原性后,将纯化后的蛋白作为抗原,建立FMDV抗体间接ELISA方法。结果显示,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,并以可溶性蛋白形式表达。建立的FMDV抗体间接ELISA方法其抗原包被最佳浓度0.5 μg/mL,使用1%BSA溶液封闭效果最佳,血清最佳稀释度1:600,酶标二抗最佳工作浓度1:8000,且具有良好的特异性、灵敏性和重复性,与商品化试剂盒比较,符合率为90.2%。本试验在大肠杆菌中成功表达并纯化了FMDV的VP1蛋白,并建立了FMDV抗体间接ELISA方法,为口蹄疫的监测、诊断及试剂盒的开发提供了参考。
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