【摘 要】
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目的探讨由野生型人caspase-3大小亚基颠倒构建的重组型caspase-3的促细胞凋亡活性.方法用RT-PCR法获得人caspase-3基因.通过重组PCR进行改造,构建小亚基位于大亚基之前的两
【机 构】
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西京医院耳鼻咽喉科;第四军医大学解剖学教研室;
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目的探讨由野生型人caspase-3大小亚基颠倒构建的重组型caspase-3的促细胞凋亡活性.方法用RT-PCR法获得人caspase-3基因.通过重组PCR进行改造,构建小亚基位于大亚基之前的两种重组型caspase-3基因,它们所对应的蛋白质的N端,分别带有或没有其自身识别的四肽序列.将上述基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pIRES2-EGFP中,转染人HeLa细胞,在荧光显微镜和电镜下观察转染细胞的形态和结构.结果成功地获得了野生型caspase-3基因及两种重组型caspase-3基因.构建了重组型caspase-3基因的表达载体.转染HeLa细胞后,重组型caspase-3基因在细胞中得到表达,随后引起细胞荧光强度下降,生长状况变差甚至死亡.电镜观察显示,许多细胞呈现凋亡的典型特征.结论重组型caspase-3可促进HeLa细胞的凋亡.
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