【摘 要】
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目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝癌细胞增殖中的作用及其机制。方法利用靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞系,构建C/EBPα肝癌细胞系敲减模型。采用q R
【机 构】
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空军军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室;
【基金项目】
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国家杰出青年科研基金资助项目(编号:81225003)
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目的探讨CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)在肝癌细胞增殖中的作用及其机制。方法利用靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞系,构建C/EBPα肝癌细胞系敲减模型。采用q RT-PCR和Western blot分别检测C/EBPαm RNA和蛋白表达水平,采用CCK-8检测敲减C/EBPα后对Hep3B细胞增殖的影响,采用在正常高葡萄糖(NG,4.5 g/L)和低葡萄糖(LG,1 g/L)条件下培养细胞的增殖变化,采用Western blot法检测不同葡萄糖浓度条件下在C/EBPα敲减细胞和对照细胞乙酰葡糖胺转移酶(OGT)、乙酰葡糖胺水解酶(OGA)和整个O-Glc NAc糖基化水平。结果靶向C/EBPα的RNAi慢病毒感染Hep3B肝癌细胞后,C/EBPαm RNA水平下调了(7.5±2.3)倍(P<0.05),蛋白表达水平下调了(8.8±0.25)倍(P<0.001),提示C/EBPα敲减细胞系构建成功;敲减C/EBPα后明显促进肝癌细胞的体外增殖;在低葡萄糖条件下刺激48 h和72 h,敲减C/EBPα分别促进细胞增殖15.4%(P<0.05)和25.0%(P<0.01);敲减C/EBPα后细胞OGA蛋白表达水平在正常高糖和低糖刺激24 h和48 h时分别下调了70.1%(P<0.01)、51.4%(P<0.05)和61.2%(P<0.05),整体O-Glc NAc糖基化表达水平上调,在低糖刺激48 h时升高80.6%。结论敲减转录因子C/EBPα可以提高细胞整体O-Glc NAc糖基化水平,从而促进肝癌细胞的体外增殖。
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