【摘 要】
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目的:为探讨肿瘤细胞wt p53蛋白功能失活机制的研究,检测肿瘤患者血清抗p53抗体辅助临床诊断提供人wt p53蛋白.方法:将人wt p53基因cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pQE-30中,
【机 构】
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汕头大学医学院生物化学教研室,香港大学微生物学系
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目的:为探讨肿瘤细胞wt p53蛋白功能失活机制的研究,检测肿瘤患者血清抗p53抗体辅助临床诊断提供人wt p53蛋白.方法:将人wt p53基因cDNA片段插入到大肠杆菌表达载体pQE-30中,得到重组表达质粒pQE30-p53;用pQE30-p53重组质粒转化大肠杆菌M15细胞,转化菌落经PCR扩增和BamHⅠ、Xba Ⅰ酶切证实p53基因插入.IPTG诱导大肠杆菌表达wt p53蛋白,通过Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE分离.结果:IPTG诱导后的大肠杆菌出现明显的53 kD蛋白带,免疫印迹进一步证实:大肠杆菌可表达高水平的人wt p53蛋白.结论:这种原核细胞表达的人wt p53蛋白具有天然的p53蛋白的抗原性,可用于p53蛋白的体外分析.
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