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目的：构建新型肝癌免疫毒素A54-PE40KDEL的原核表达载体，诱导表达后检测其生物活性。方法：PCR扩增绿脓杆菌外毒素APE40KDEL基因插入到pET32a（＋），然后与合成的含有肠激酶酶切位点和肝癌特异性结合肽A54的核酸序列连接，构建重组表达载体pET32a（＋）-A54-PE40KDEL，其经鉴定后转化E．coli BL21表达。超声破菌，上清液经Ni^＋亲和层析纯化，肠激酶酶切，再次Ni^＋离子亲和层析后得到免疫毒素A54-PE40KDEL。MTT间接免疫荧光技术检测其对不同细胞株的细胞毒性