【摘 要】
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目的 以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,优化悬浮培养的白血病细胞的电穿孔转染条件.方法 通过控制电压(200～400 V)、电容(450～1200μF)、细胞状态及缓冲液血清浓度(0%、10%、15%
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目的 以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,优化悬浮培养的白血病细胞的电穿孔转染条件.方法 通过控制电压(200～400 V)、电容(450～1200μF)、细胞状态及缓冲液血清浓度(0%、10%、15%)等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒转入悬浮培养的人白血病细胞株K562,通过流式细胞仪和荧光显微镜分析转染率.结果 K562细胞在310 V、1050μF条件下转染率最高,pEGFP-C2/K562为67.04%,pEGFP-C2/BRD7/K562为59.29%.对数生长期细胞电转染率高于生长过老期细胞;而缓冲液中的血清浓度与电转染率无关.结论 电穿孔是一种高效的基因转染法,通过优化转染条件、控制影响因素,可提高转染率.
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