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用碱变性法从淋球菌D参考菌株获得4.2kb质粒DNA，用Hind Ⅲ限制性内切酶消化4.2kb质粒DNA和pBR322载体质粒DNA，经T4连接酶连接后，转化到E.coli MC 1061菌株中，获得氨苄抗性转化子。经HindⅢ、EcoRI单酶切和EcoRI/BamHI双酶切鉴定，两个转化子为淋球菌4.2kb质粒DNA与pBR322载体质粒DNA的重组子。用32P标记的淋球菌4.2kb DNA探针与重组子DNA进行杂交试验，进一步证明了重组子含有淋球菌4.2kb质粒DNA。载体质粒pBR322与淋球菌4.2kb质粒DNA无同源性。