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目的
建立乙腈萃取前处理方法和高效液相色谱(HPLC)法测定尿中马尿酸(HA)、甲基马尿酸(MHA)。
方法尿中HA、MHA在酸性条件下用乙腈萃取,高效液相-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)检测,色谱条件:C18柱(150 mm× 4.6 mm,5 μm),以甲醇∶0.20%乙酸水溶液(含6.5 mmol/L磷酸二氢钾)(25∶75,V/V)为流动相,流速为1 ml/min,波长为254 nm。
结果HA、2-甲基马尿酸(2-MHA)、3-甲基马尿酸(3-MHA)[4-甲基马尿酸(4-MHA)]分别在9.91~2 974.20 μg/ml、1.91~573.60 μg/ml、2.00~598.65 μg/ml线性关系良好,相关系数分别为0.999 98、0.999 84、0.999 85; HA、2-MHA、3-MHA(4-MHA)回收率分别为96.38%~98.01%、83.17%~94.05%、103.22%~104.45%,批内精密度相对标准偏差(RSD)分别为0.50%~1.20%、0.51%~1.59%、0.49%~0.95%,批间精密度RSD分别为1.70%~3.20%、1.30%~2.67%、0.86%~2.74%,检出限分别为0.18、0.46、0.12 μg/ml,最低检出浓度分别为0.36、0.92、0.24 μg/ml(以尿样1 ml计);样品在4 ℃冰箱中可保存15 d。
结论乙腈萃取尿中HA、MHA前处理方法简单易行,符合GBZ/T 210.5-2008《职业卫生标准制定指南第5部分:生物材料中化学物质测定方法》的相关要求,可用于职业接触甲苯、二甲苯人群尿中HA、MHA的测定。