miR-199a在妊娠糖尿病中的表达及参与胰岛素抵抗的作用机制研究

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目的 探究微小RNA(miR)-199a在妊娠糖尿病(GDM)中的表达及调控沉默信息调节因子1(SIRT1)/叉头盒转录因子O1(FOXO1)通路参与胰岛素抵抗(IR)的机制.方法 GDM孕妇56例为GDM组,正常孕妇60例为正常孕妇组,实时荧光定量PCR(qPCR)检测2组胎盘中miR-199a水平;计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Pearson相关分析miR-199a与HOMA-IR的相关性.体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo并建立IR模型.miR-199a功能验证:细胞依处理方式不同分为模型组、miRNA inhibitor NC组、miR-199a inhibitor组、miRNA mimic NC组、miR-199a mimic组;qPCR检测各组细胞中miR-199a表达情况,蒽酮法检测细胞内葡萄糖吸收量,试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、乙酰化(Ac)-FOXO1蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-199a与SIRT1的靶向关系.结果 与正常孕妇组比较,GDM组胎盘中miR-199a、HOMA-IR水平升高(P<0.05);GDM组miR-199a水平与HOMA-IR呈正相关(P<0.05).棕榈酸、胰岛素共同作用细胞24 h成功建立IR模型.与模型组和miRNA inhibitor NC组比较,miR-199a inhibitor组miR-199a、MDA水平降低,葡萄糖吸收量、SOD水平、SIRT1蛋白水平升高(P<0.05).与模型组和miRNA mimic NC组比较,miR-199a mimic组miR-199a和Ac-FOXO1蛋白表达升高、MDA水平升高,葡萄糖吸收量、SIRT1蛋白水平降低(P<0.05).Tarbase数据库分析显示,miR-199a与SIRT1存在互补的结合位点,并经双荧光素酶实验证实.结论 GDM患者胎盘中miR-199a高表达,升高的miR-199a可通过靶向下调SIRT1而促进FOXO1乙酰化,导致IR.
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