【摘 要】
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以水稻叶片、根和种子为材料,采用高通量快速法提取基因组DNA,用稻瘟病Pita基因分子标记进行检测,获得与预期片段大小一致的特异性条带,对165份育种材料的检测结果与稻瘟病接
【机 构】
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云南省农业科学院粮食作物研究所,美国农业部农业研究局,阿肯色州立大学
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以水稻叶片、根和种子为材料,采用高通量快速法提取基因组DNA,用稻瘟病Pita基因分子标记进行检测,获得与预期片段大小一致的特异性条带,对165份育种材料的检测结果与稻瘟病接种鉴定一致.操作方法如下:将少量水稻叶片、根或种子放入200 μL PCR盘中,加入70 μL缓冲液A(含NaOH和Tween20),在PCR仪中加热到95℃,保持10 min,再加入70 μL缓冲液B(Tris-HCl和EDTA),该提取液可以直接用于PCR扩增.该方法具有几个优点:1)成本低,仅用4种化学试剂,共140 μL提取液;2)操作简便,仅需3步,每人每天可以提取上千份样品;3)仪器设备简单,只用常规的PCR仪;4)可直接提取干种子的DNA;5)DNA质量好,能检测出水稻中的抗稻瘟病单基因Pita,并且与稻瘟病接种鉴定结果一致;6)用量少,只需要5～20 mg叶片、20 mg根或半粒籽粒.尤其是检测大量样本的基因型时,此种方法更显得高效便捷.
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