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目的
探讨白细胞介素6(IL-6)在体外诱导Barrett食管细胞株(CP-D)发生上皮间质转变(EMT)中的作用。
方法应用0、10、20、50、100 μg/L不同浓度梯度IL-6刺激CP-D细胞,然后采用光学显微镜观察细胞形态学变化,划痕实验、transwell实验检测CP-D细胞的侵袭和迁移能力变化,实时荧光定量-PCR、蛋白质印迹和免疫荧光检测CP-D细胞中上皮细胞标志物E-钙黏附蛋白、间质细胞标志物波形蛋白表达情况。
结果不同浓度梯度IL-6刺激CP-D 24 h后致其极性丧失,细胞间的黏附连接减少。划痕实验计数24 h迁移细胞数,10、20、50、100 μg/L组均高于0 μg/L组(328±47、347±59、483±62、492±55比131±22,均P<0.05)。transwell实验证明,10、20、50、100 μg/L IL-6组迁移过膜的细胞数目均高于0 μg/L组(62±11、67±15、97±12、99±13比13±5,均P<0.05)。荧光定量实时PCR的结果提示,50 μg/L组E-钙黏附蛋白mRNA相对表达量低于20 μg/L组(0.47±0.16比0.79±0.07,P=0.012),而波形蛋白mRNA相对表达量则高于20 μg/L组(1.78±0.37比1.43±0.15,P=0.026),蛋白质印迹与PCR结果一致,均提示50 μg/L为IL-6刺激致CP-D细胞发生EMT的最适浓度。
结论IL-6刺激可致CP-D细胞发生EMT,同时使CP-D细胞侵袭,迁移能力增强,促进其发生恶变。