【摘 要】
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目的探讨脾脏CD4＋T细胞组蛋白乙酰化修饰与非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠糖尿病肾病发生及进展的关系。方法SPF级雌性NOD小鼠24只，8周龄，随机分为4组，检测12、18、24、30周龄小鼠的随机血糖，酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测尿白蛋白和尿肌酐。分离脾脏CD4＋T细胞，H3、H4乙酰化试剂盒检测CD4＋T细胞H3、H4总体乙酰化水平，实时定量PCR检测组蛋白乙酰化相关修饰酶的mRNA
【机 构】
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410011 长沙，中南大学湘雅二医院重症监护中心,410011 长沙，中南大学湘雅二医院重症监护中心,中南大学湘雅二医院内分泌科 中南大学糖尿病中心 中南大学代谢内分泌研究所 糖尿病免疫学教育部重点
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目的探讨脾脏CD4＋T细胞组蛋白乙酰化修饰与非肥胖型糖尿病(NOD)小鼠糖尿病肾病发生及进展的关系。
方法SPF级雌性NOD小鼠24只，8周龄，随机分为4组，检测12、18、24、30周龄小鼠的随机血糖，酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测尿白蛋白和尿肌酐。分离脾脏CD4＋T细胞，H3、H4乙酰化试剂盒检测CD4＋T细胞H3、H4总体乙酰化水平，实时定量PCR检测组蛋白乙酰化相关修饰酶的mRNA水平，Western印迹法验证实时定量PCR筛选出的阳性基因。
结果与12周龄NOD小鼠相比，24和30周龄鼠血糖升高[(18.1±6.3)、(20.7±7.5)mmol/L比(7.2±3.1)mmol/L]，尿白蛋白/肌酐比值升高[(4.04±1.54)、(8.11±1.77)mg/g比(2.12±0.56)mg/g]，脾脏CD4＋T细胞H3总体乙酰化水平降低[(0.068±0.023)、(0.043±0.017)比(0.127±0.036)]，H4总体乙酰化水平降低[(0.058±0.022)、(0.041±0.019)比(0.082±0.032)]，均P<0.05。在组蛋白乙酰化修饰酶谱中，与12周龄NOD小鼠相比，24和30周龄鼠组蛋白乙酰转移酶P300的mRNA水平下降[(15.53±6.31)、(13.76±3.62)比(22.94±7.40)]，P300/CBP相关因子(PCAF)的mRNA水平也降低[(3.21±0.81)、(2.74±0.36)比(5.31±0.73)]，而HDAC5 mRNA及蛋白表达水平升高(均P<0.05)。24和30周龄中已发病的NOD小鼠H3(r＝－0.590，P＝0.043)、H4(r＝－0.702，P＝0.011)乙酰化水平与尿白蛋白/肌酐比值呈负相关，HDAC5表达水平与尿白蛋白/肌酐比值呈正相关(r＝0.673，P＝0.016)。
结论随着NOD小鼠周龄及肾脏损伤的进展，其脾脏CD4＋T细胞总体H3、H4乙酰化水平降低，组蛋白去乙酰化酶HDAC5表达水平升高。CD4＋T细胞中HDAC5的异常升高与NOD小鼠肾脏损害相关。
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