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摘 要：为了找到山东聊城地区817肉雏鸡沙门氏菌阳性的来源，以及沙门氏菌开始转阳的关键时间节点，采用沙门氏菌分离培养、生化鉴定和血清学鉴定的方法，连续跟踪采样检测三次，对聊城地区817肉雏鸡沙门氏菌进行溯源调查。结果显示：第一次，在孵化场出雏器进风口和地面中，分离出肠炎沙门氏菌;第二次，在孵化场的绒毛和消毒后纸盒中分离出肠炎沙门氏菌。研究提示：孵化场是沙门氏菌污染的高危环节，应加大对孵化场卫生消毒的监督力度，确保雏鸡质量。
关键词：肠炎沙门氏菌;817肉雏鸡;分离培养;孵化场;出雏器
中图分类号：S858.311.31+3 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2020）8-0045-04
817肉鸡是快大型白羽肉鸡父母代父系公鸡作父本、高产褐壳蛋鸡商品代作母本的杂交鸡，是中华传统名吃德州扒鸡的来源，主要分布于鲁西地区。近些年来，817肉鸡从山东逐渐扩展到河北、河南、江苏等地。据中国畜牧业协会统计，2017年全国鸡肉总产量1469万吨，其中817肉鸡的产肉量为106万吨，占鸡肉总产量的7.21%，已发展成为我国肉鸡生产的三大主导品种类型（白羽肉鸡、黄羽肉鸡、817肉鸡）之一[1]，发展空间巨大。
随着行业的发展，817肉鸡也面临配套制种模式不规范、种源性疾病净化等诸多问题的困扰[2]。其中，沙门氏菌病是817肉鸡育雏期间发病率高、危害性大的一種常见垂直传播疾病，包括白痢、肠炎沙门氏菌病等。
2019年末，据山东聊城地区集团客户反映，其下游客户在配套杂交制种培育的817肉雏鸡连续检出沙门氏菌。本研究从种鸡场、孵化场、运蛋车辆和化验室多个环节作为切入点，找到了817肉雏鸡沙门氏菌阳性的来源，为817肉鸡沙门氏菌的防控指明了方向。
1 材料与方法
1.1 试验对象 聊城某种鸡场、某运蛋车辆、某孵化场等。
1.2 试验频次 连续采样检测，跟踪3个月（2月、3月、4月）。
1.3 试验方法 沙门氏菌分离培养、生化鉴定、血清学鉴定、血清平板凝集试验等。
1.4 试剂与仪器 缓冲蛋白胨水（BPW），货号CM201，购自北京陆桥;三糖铁琼脂（TSI），货号CM205，购自北京陆桥;四硫磺酸盐煌绿增菌液基础（TTB），货号CM203，购自北京陆桥;营养琼脂，货号CM107，购自北京陆桥;沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒，货号DBI-05，购自北京陆桥;沙门氏菌显色培养基，法国科玛嘉CHROMagar;沙门氏菌属诊断血清，购自宁波天润生物药业有限公司;平板凝集试验抗原，购自北京中海生物;恒温箱，购自上海树立仪器;超净工作台，购自苏州苏洁等。
1.5 试验方案设计
1.5.1 种鸡场采样
1.5.1.1 场区环境 样品包括鸡舍的风机、笼具、地面、粪便、水线水、水源水、料塔料等，以及蛋库的地面、蛋盘、蛋筐、中央链条等，设置20%的阴性对照样品。地面穿着鞋套采样，粪便用棉拭子采样，水样、料塔料用无菌均质袋采样，其他用纱布采样。具体采样方法，详见种鸡场微生物采样SOP。
1.5.1.2 鸡群血清 每月每个鸡舍，例行性地送检30份血清，进行血清平板凝集试验。
1.5.1.3 鸡蛋样品 每个鸡舍取30枚鸡蛋，10个鸡蛋的蛋壳合并为1个蛋壳样品，10个鸡蛋的蛋清蛋黄（1 mL蛋清+1 mL蛋黄）合并为1个内容物样品，每个鸡舍共计3个蛋壳样品和3个内容物样品。
1.5.2 运蛋车辆采样 对种鸡场固定的运蛋车辆进行无菌纱布采样，采样部位包括驾驶室、车厢内、车底盘等。
1.5.3 孵化场采样
1.5.3.1 入孵前环境 采样部位包括入孵的孵化器内环境，如内壁、地面、进风口、蛋车等，以及前工序样品。
1.5.3.2 落盘前环境 同入孵前环境采样。
1.5.3.3 孵化19d环境 采样部位包括出雏器内环境，如内壁、地面、进风口、蛋车等，以及断喙机、打针机等后工序样品。
1.5.3.4 出雏当天环境 同孵化19d环境采样。
1.5.3.5 雏鸡样品 包括健雏、弱雏、终止胚、胎粪等，采样方法见SOP。
1.5.3.6 孵化场环境样品 使用纱布采样，设置20%的阴性对照。
1.5.4 化验室采样 样品包括采样箱、恒温箱、超净台、地面、桌面、人员手部等。
1.5.5 检测方法 流程见图1。
2 结果与分析
连续三次采样检测：第一次，在孵化场出雏器的进风口和地面中分离出肠炎沙门氏菌（SE）;第二次，在孵化场的绒毛和消毒后纸盒中分离出SE;第三次，在种鸡场、孵化场、车辆和化验室的样品中均未检出沙门氏菌。详细结果见表1和表2。
3 讨论
1988年8月17日，山东省农业科学院家禽研究所首创了利用快大型白羽肉鸡父母代父系公鸡作父本、高产褐壳蛋鸡商品代作母本的杂交制种模式，培育出专门为扒鸡而生的小型优质肉鸡，使扒鸡生产实现了现代化、标准化，称为“817肉鸡”。除了用于加工德州扒鸡外，817肉鸡还开发出西装鸡、调理鸡、烧鸡、烤鸡等丰富的熟食加工产品，主产地区也从山东逐渐扩展到河北、河南、江苏等地。 然而，817肉鸡面临着制种不规范、饲料营养等配套技术不完善、垂直传播疾病等问题困扰。其中，沙门氏菌是817肉雏鸡生产中发病率高、危害性大的一种常见病，较突出的主要是白痢、肠炎、伤寒等血清型沙门氏菌。
2019年末，据山东聊城某集团客户反映，其下游客户在配套杂交选育的817肉雏鸡中连续多次检出沙门氏菌，造成较大的经济损失和食品安全问题。为了满足客户急切需求，开展了本次沙门氏菌溯源调查。结果显示，种鸡场、运蛋车辆、化验室样品中均未检出沙门氏菌，只在孵化场环境检出肠炎沙门氏菌，具体在出雏器的进风口和地面以及消毒后纸盒和绒毛。这表明，种鸡场、运蛋车辆的沙门氏菌控制取得了一定的成效，而孵化场环境中存在沙门氏菌的污染，原因可能是冲洗消毒不彻底或其他部位交叉传染。原来的检测数据显示，在雏鸡中多次检出沙门氏菌，笔者认为，这除了孵化场污染的因素外，种鸡自身也可能存在感染，只是感染量很低，或者检测方法的灵敏度差。本次雏鸡中未检出沙门氏菌而从孵化场环境检出，雏鸡未从污染的环境中感染沙门氏菌，这可能与感染量、检测方法及其他因素有关。
沙门氏菌污染的破蛋是孵化场污染最主要的风险，因此种鸡场的地上蛋、脏蛋、洗过的蛋都不应上架;绒毛飞散是孵化期间交叉感染控制的难点，要防止绒毛通过空气、人或物的流动从阳性禽群向阴性禽群的转移[3]。姬久玲等[4]建议，孵化场内禁止人和物的逆向流动，塑料蛋托采用浸泡消毒，孵化工具和免疫工具等做到专厅专用，入孵前严格控制种蛋表面微生物，入孵1胚龄、18胚龄落盘和出雏率达50%时，采用福尔马林熏蒸消毒，以避免孵化过程的污染。嚴格的生物安全管理、减少孵化器（密度）的数量以及监控水质等，有助于实现孵化场无沙门氏菌[5]的目标。另外，下水道和排风扇也应作为孵化场沙门氏菌监测的重要对象，并保证通风的风向合理[6]。
要想实现无沙门氏菌的状态，不仅孵化场要严格执行全面彻底的卫生消毒程序，还要依靠种鸡场的一系列生物安全措施，前者是为了杜绝上一批次的污染，后者则是要求提供清洁的可入孵种蛋，两者相辅相成，缺一不可[7]。有研究指出[8]，饲料（原料）、微生态制剂、酶制剂等存在严重的沙门氏菌污染，应制定严格的采购标准，饲料厂各部位的沙门氏菌污染也很严重，建议减少粉尘，保证卫生无菌，并定期监测。
因此，接下来会就孵化场出雏器等各环节进行跟踪，并制定相应的防控方案;同时，持续推进、严格落实种鸡场的生物安全各项制度与措施，最终达到净化沙门氏菌的目标。
4 结论
聊城地区817肉雏鸡沙门氏菌的溯源调查结果显示，种鸡场、运蛋车辆均未检出沙门氏菌，而从孵化场的出雏器出风口、地面及消毒后纸盒、绒毛中分离出肠炎沙门氏菌。这揭示了，孵化场是雏鸡沙门氏菌防控的关键环节，今后应该把更多的精力放在孵化场的生物安全上，最终达到净化沙门氏菌的目标。
参考文献：
[1] 曹顶国，雷秋霞，韩海霞，等. 817肉鸡的发展历程和发展趋势[A].中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集[C].北京：中国畜牧兽医协会，2018：29.
[2] 雷秋霞，逯岩，曹顶国. 817肉鸡在我国肉鸡生产中的地位和作用[J]. 家禽科学，2019（7）：3-5.
[3] 王芳，译. 孵化场沙门氏菌的控制[J]. 孵禽技术，2001，18（8）：30.
[4] 姬久玲，卢运体.孵化场卫生消毒管理要点[J]. 家禽科学，2008，6：24.
[5] 郑书轩（译）.孵化场实现无沙门氏菌污染的重要步骤[J].国外畜牧学-猪与禽，2017，37（1）：7-10.
[6] 郝春光.孵化场的卫生与检测[J]. 中国禽业导刊，2016，33（8）：65-66.
[7] 高娃，孙许远，译. 潘雪男，校. 孵化场内的有效卫生措施[J]. 国外畜牧学-猪与禽，2011，31（1）：57-59.
[8] 郭昱含.家禽沙门氏菌传播途径及防控措施[J]. 国外畜牧学-猪与禽，2019，39（8）：95-98.
Abstract：In order to find out the source of Salmonella in 817 chick broilers in Liaocheng area of Shandong Province， and critical time point for Salmonella to turn positive， continuous sampling and detection were done for three times， by the methods of isolation， culture， biochemical and serological identification of Salmonella. The results have been shown that Salmonella enteritidis was isolated from the air inlet and ground of hatcher in the hatchery for the first time， and Salmonella enteritidis was isolated from the chick down and sterilized cartons in the hatchery， secondly. This study have suggested that hatchery is a high risk link of Salmonella contamination. For this reason， the supervision of disinfection of hatchery should be strengthened to ensure the quality of chicks.
Key words： Salmonella enteritidis; 817 chick broilers; isolation and culture; hatchery; hatcher
关键词：肠炎沙门氏菌;817肉雏鸡;分离培养;孵化场;出雏器
中图分类号：S858.311.31+3 文献标识码：B 文章编号：1673-1085（2020）8-0045-04
817肉鸡是快大型白羽肉鸡父母代父系公鸡作父本、高产褐壳蛋鸡商品代作母本的杂交鸡，是中华传统名吃德州扒鸡的来源，主要分布于鲁西地区。近些年来，817肉鸡从山东逐渐扩展到河北、河南、江苏等地。据中国畜牧业协会统计，2017年全国鸡肉总产量1469万吨，其中817肉鸡的产肉量为106万吨，占鸡肉总产量的7.21%，已发展成为我国肉鸡生产的三大主导品种类型（白羽肉鸡、黄羽肉鸡、817肉鸡）之一[1]，发展空间巨大。
随着行业的发展，817肉鸡也面临配套制种模式不规范、种源性疾病净化等诸多问题的困扰[2]。其中，沙门氏菌病是817肉鸡育雏期间发病率高、危害性大的一種常见垂直传播疾病，包括白痢、肠炎沙门氏菌病等。
2019年末，据山东聊城地区集团客户反映，其下游客户在配套杂交制种培育的817肉雏鸡连续检出沙门氏菌。本研究从种鸡场、孵化场、运蛋车辆和化验室多个环节作为切入点，找到了817肉雏鸡沙门氏菌阳性的来源，为817肉鸡沙门氏菌的防控指明了方向。
1 材料与方法
1.1 试验对象 聊城某种鸡场、某运蛋车辆、某孵化场等。
1.2 试验频次 连续采样检测，跟踪3个月（2月、3月、4月）。
1.3 试验方法 沙门氏菌分离培养、生化鉴定、血清学鉴定、血清平板凝集试验等。
1.4 试剂与仪器 缓冲蛋白胨水（BPW），货号CM201，购自北京陆桥;三糖铁琼脂（TSI），货号CM205，购自北京陆桥;四硫磺酸盐煌绿增菌液基础（TTB），货号CM203，购自北京陆桥;营养琼脂，货号CM107，购自北京陆桥;沙门氏菌干制生化鉴定试剂盒，货号DBI-05，购自北京陆桥;沙门氏菌显色培养基，法国科玛嘉CHROMagar;沙门氏菌属诊断血清，购自宁波天润生物药业有限公司;平板凝集试验抗原，购自北京中海生物;恒温箱，购自上海树立仪器;超净工作台，购自苏州苏洁等。
1.5 试验方案设计
1.5.1 种鸡场采样
1.5.1.1 场区环境 样品包括鸡舍的风机、笼具、地面、粪便、水线水、水源水、料塔料等，以及蛋库的地面、蛋盘、蛋筐、中央链条等，设置20%的阴性对照样品。地面穿着鞋套采样，粪便用棉拭子采样，水样、料塔料用无菌均质袋采样，其他用纱布采样。具体采样方法，详见种鸡场微生物采样SOP。
1.5.1.2 鸡群血清 每月每个鸡舍，例行性地送检30份血清，进行血清平板凝集试验。
1.5.1.3 鸡蛋样品 每个鸡舍取30枚鸡蛋，10个鸡蛋的蛋壳合并为1个蛋壳样品，10个鸡蛋的蛋清蛋黄（1 mL蛋清+1 mL蛋黄）合并为1个内容物样品，每个鸡舍共计3个蛋壳样品和3个内容物样品。
1.5.2 运蛋车辆采样 对种鸡场固定的运蛋车辆进行无菌纱布采样，采样部位包括驾驶室、车厢内、车底盘等。
1.5.3 孵化场采样
1.5.3.1 入孵前环境 采样部位包括入孵的孵化器内环境，如内壁、地面、进风口、蛋车等，以及前工序样品。
1.5.3.2 落盘前环境 同入孵前环境采样。
1.5.3.3 孵化19d环境 采样部位包括出雏器内环境，如内壁、地面、进风口、蛋车等，以及断喙机、打针机等后工序样品。
1.5.3.4 出雏当天环境 同孵化19d环境采样。
1.5.3.5 雏鸡样品 包括健雏、弱雏、终止胚、胎粪等，采样方法见SOP。
1.5.3.6 孵化场环境样品 使用纱布采样，设置20%的阴性对照。
1.5.4 化验室采样 样品包括采样箱、恒温箱、超净台、地面、桌面、人员手部等。
1.5.5 检测方法 流程见图1。
2 结果与分析
连续三次采样检测：第一次，在孵化场出雏器的进风口和地面中分离出肠炎沙门氏菌（SE）;第二次，在孵化场的绒毛和消毒后纸盒中分离出SE;第三次，在种鸡场、孵化场、车辆和化验室的样品中均未检出沙门氏菌。详细结果见表1和表2。
3 讨论
1988年8月17日，山东省农业科学院家禽研究所首创了利用快大型白羽肉鸡父母代父系公鸡作父本、高产褐壳蛋鸡商品代作母本的杂交制种模式，培育出专门为扒鸡而生的小型优质肉鸡，使扒鸡生产实现了现代化、标准化，称为“817肉鸡”。除了用于加工德州扒鸡外，817肉鸡还开发出西装鸡、调理鸡、烧鸡、烤鸡等丰富的熟食加工产品，主产地区也从山东逐渐扩展到河北、河南、江苏等地。 然而，817肉鸡面临着制种不规范、饲料营养等配套技术不完善、垂直传播疾病等问题困扰。其中，沙门氏菌是817肉雏鸡生产中发病率高、危害性大的一种常见病，较突出的主要是白痢、肠炎、伤寒等血清型沙门氏菌。
2019年末，据山东聊城某集团客户反映，其下游客户在配套杂交选育的817肉雏鸡中连续多次检出沙门氏菌，造成较大的经济损失和食品安全问题。为了满足客户急切需求，开展了本次沙门氏菌溯源调查。结果显示，种鸡场、运蛋车辆、化验室样品中均未检出沙门氏菌，只在孵化场环境检出肠炎沙门氏菌，具体在出雏器的进风口和地面以及消毒后纸盒和绒毛。这表明，种鸡场、运蛋车辆的沙门氏菌控制取得了一定的成效，而孵化场环境中存在沙门氏菌的污染，原因可能是冲洗消毒不彻底或其他部位交叉传染。原来的检测数据显示，在雏鸡中多次检出沙门氏菌，笔者认为，这除了孵化场污染的因素外，种鸡自身也可能存在感染，只是感染量很低，或者检测方法的灵敏度差。本次雏鸡中未检出沙门氏菌而从孵化场环境检出，雏鸡未从污染的环境中感染沙门氏菌，这可能与感染量、检测方法及其他因素有关。
沙门氏菌污染的破蛋是孵化场污染最主要的风险，因此种鸡场的地上蛋、脏蛋、洗过的蛋都不应上架;绒毛飞散是孵化期间交叉感染控制的难点，要防止绒毛通过空气、人或物的流动从阳性禽群向阴性禽群的转移[3]。姬久玲等[4]建议，孵化场内禁止人和物的逆向流动，塑料蛋托采用浸泡消毒，孵化工具和免疫工具等做到专厅专用，入孵前严格控制种蛋表面微生物，入孵1胚龄、18胚龄落盘和出雏率达50%时，采用福尔马林熏蒸消毒，以避免孵化过程的污染。嚴格的生物安全管理、减少孵化器（密度）的数量以及监控水质等，有助于实现孵化场无沙门氏菌[5]的目标。另外，下水道和排风扇也应作为孵化场沙门氏菌监测的重要对象，并保证通风的风向合理[6]。
要想实现无沙门氏菌的状态，不仅孵化场要严格执行全面彻底的卫生消毒程序，还要依靠种鸡场的一系列生物安全措施，前者是为了杜绝上一批次的污染，后者则是要求提供清洁的可入孵种蛋，两者相辅相成，缺一不可[7]。有研究指出[8]，饲料（原料）、微生态制剂、酶制剂等存在严重的沙门氏菌污染，应制定严格的采购标准，饲料厂各部位的沙门氏菌污染也很严重，建议减少粉尘，保证卫生无菌，并定期监测。
因此，接下来会就孵化场出雏器等各环节进行跟踪，并制定相应的防控方案;同时，持续推进、严格落实种鸡场的生物安全各项制度与措施，最终达到净化沙门氏菌的目标。
4 结论
聊城地区817肉雏鸡沙门氏菌的溯源调查结果显示，种鸡场、运蛋车辆均未检出沙门氏菌，而从孵化场的出雏器出风口、地面及消毒后纸盒、绒毛中分离出肠炎沙门氏菌。这揭示了，孵化场是雏鸡沙门氏菌防控的关键环节，今后应该把更多的精力放在孵化场的生物安全上，最终达到净化沙门氏菌的目标。
参考文献：
[1] 曹顶国，雷秋霞，韩海霞，等. 817肉鸡的发展历程和发展趋势[A].中国畜牧兽医学会2018年学术年会禽病学分会第十九次学术研讨会论文集[C].北京：中国畜牧兽医协会，2018：29.
[2] 雷秋霞，逯岩，曹顶国. 817肉鸡在我国肉鸡生产中的地位和作用[J]. 家禽科学，2019（7）：3-5.
[3] 王芳，译. 孵化场沙门氏菌的控制[J]. 孵禽技术，2001，18（8）：30.
[4] 姬久玲，卢运体.孵化场卫生消毒管理要点[J]. 家禽科学，2008，6：24.
[5] 郑书轩（译）.孵化场实现无沙门氏菌污染的重要步骤[J].国外畜牧学-猪与禽，2017，37（1）：7-10.
[6] 郝春光.孵化场的卫生与检测[J]. 中国禽业导刊，2016，33（8）：65-66.
[7] 高娃，孙许远，译. 潘雪男，校. 孵化场内的有效卫生措施[J]. 国外畜牧学-猪与禽，2011，31（1）：57-59.
[8] 郭昱含.家禽沙门氏菌传播途径及防控措施[J]. 国外畜牧学-猪与禽，2019，39（8）：95-98.
Abstract：In order to find out the source of Salmonella in 817 chick broilers in Liaocheng area of Shandong Province， and critical time point for Salmonella to turn positive， continuous sampling and detection were done for three times， by the methods of isolation， culture， biochemical and serological identification of Salmonella. The results have been shown that Salmonella enteritidis was isolated from the air inlet and ground of hatcher in the hatchery for the first time， and Salmonella enteritidis was isolated from the chick down and sterilized cartons in the hatchery， secondly. This study have suggested that hatchery is a high risk link of Salmonella contamination. For this reason， the supervision of disinfection of hatchery should be strengthened to ensure the quality of chicks.
Key words： Salmonella enteritidis; 817 chick broilers; isolation and culture; hatchery; hatcher