【摘 要】
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目的:初步探讨三基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制。方法:应用基因克隆技术构建TRIM25高表达
【机 构】
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重庆医科大学附属第一医院药剂科,重庆医科大学附属第二医院核医学科
【基金项目】
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重庆市卫生局医学科研重点资助项目(编号:2011-1-036)
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目的:初步探讨三基序蛋白25(tripartite motif containing 25,TRIM25)过表达对人肺癌细胞株H1299顺铂敏感性的影响及其分子作用机制。方法:应用基因克隆技术构建TRIM25高表达质粒载体,瞬时转染人肺癌细胞株H1299,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot法检测TRIM25蛋白表达水平及其过表达时丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)蛋白水平的变化。用顺铂分别处理转染前后的H1299细胞24 h,MTT法检测细胞耐药性,Annexin V/PI双染法流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡。结果 :同H1299空白组和转染pGCMV/neo空载体组比较,pGCMV-trim25转染组细胞中TRIM25蛋白的表达水平明显增加(P=0.003,P=0.005);且TRIM25过表达时,细胞中PKM2蛋白的表达水平降低(P=0.001,P=0.003)。用顺铂处理后,pGCMV-trim25转染组细胞的药物敏感性显著下降(P<0.001),转染组细胞凋亡率亦明显降低(P<0.001)。结论:TRIM25在肺癌细胞H1299中高表达时,可能通过下调PKM2而降低对顺铂的敏感性。
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