【摘 要】
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目的利用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac system)在sf9细胞中表达重组人降钙素原蛋白(procalcitonin,PCT)。方法将PCT基因克隆至转移载体pFastBacTM1中,构建重组转移载体pF
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目的利用昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac system)在sf9细胞中表达重组人降钙素原蛋白(procalcitonin,PCT)。方法将PCT基因克隆至转移载体pFastBacTM1中,构建重组转移载体pFB-PCT,将其与野生型多角体病毒Bacmid同源重组,获得重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-PCT,采用脂质体转染法将鉴定正确的重组杆状病毒穿梭质粒转染sf9细胞,收获P1杆状病毒Bac-PCT,经扩增获得P3代杆状病毒,感染sf9细胞,Western blot法检测重组PCT的抗原活性。结果重组杆状病毒穿梭质粒经PCR及测序鉴定证明构建正确;已成功转染人sf9细胞,P3杆状病毒滴度为1.2×108pfu/ml;重组人PCT可被小鼠抗降钙素原单克隆抗体特异性识别,在相对分子质量约13 000处可见特异性条带。结论已在sf9细胞中成功表达重组人PCT,表达产物具有抗原性。
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