【摘 要】
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目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)蛋白对人肝癌细胞(HepG2)的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1(鼻咽癌细胞系)细胞生存能力的影响。方法构建pEGFP-N1/CTCF、CTCFshRNA和GFPshRN
【机 构】
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四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室; 四川大学华西第二医院妇产科教研室; 四川大学华西医院肝血管外科;
【基金项目】
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国家自然科学基金(No.81172372)资助
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目的探讨CCCTC结合因子(CTCF)蛋白对人肝癌细胞(HepG2)的肿瘤干细胞的影响以及对HepG2和CNE1(鼻咽癌细胞系)细胞生存能力的影响。方法构建pEGFP-N1/CTCF、CTCFshRNA和GFPshRNA质粒,转染至HepG2和CNE1细胞后,以RT-PCR及Western blot检测CTCF mRNA和蛋白的表达。采用流式细胞术检测转染CTCF-shRNA质粒后48h的HepG2细胞中携带表面抗原CD90肿瘤干细胞的比例,以转染GFP-shRNA的HepG2细胞和野生型HepG2细胞为对照。采用MTT方法分别检测转染CTCF过表达重组质粒及CTCF-shRNA质粒后24、48、72hHepG2和CNE1细胞的生存能力。结果 pEGFP-N1/CTCF转染后增加HepG2和CNE1细胞中CTCF mRNA和蛋白的表达(与pEGFP-N1相比,P<0.05),CTCF-shRNA转染则降低表达(与GFP-shRNA相比,P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,CD90+细胞的检出率在转染CTCF-shRNA质粒细胞〔(1.733 0±0.417 7)%〕高于野生型HepG2细胞〔(0.575 0±0.062 9)%〕及转染对照GFP-shRNA质粒细胞〔(0.350 0±0.086 6)%〕(P<0.05);MTT实验结果显示CTCF的表达改变对HepG2和CNE1细胞的生存能力的影响不明显(P>0.05)。结论 CTCF可抑制人肝癌干细胞生成,对HepG2和CNE1细胞生长无明显影响。
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