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摘要 为了适应桑树多元化发展对药食专用品种的需求，采用了分光光度法对贵州省蚕业研究所贵阳桑园基地的60个桑品种桑叶中总黄酮含量进行了测定。结果表明：桑叶总黄酮含量分布在14.765～52.269 mg/g之间，平均含量为27.078 mg/g，品种间差异较大，变异系数为29%。其中道真桑、特优2号、川-16总黄酮含量高，生长优势明显，因而具有较高的药食用途开发利用价值。
关键词 桑叶；品種；总黄酮；紫外分光光度法
中图分类号 R284 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）03-0223-01
长期以来，栽植桑树主要被用来养蚕，随着经济的不断发展，这种单纯的栽桑养蚕形式已不符合农业多元化发展趋势，随着科研人员对桑树研究的深入，桑叶的营养价值和药用价值已越来越引起人们的关注，黄酮类物质是桑叶发挥功效的主要活性成分之一，具有多种生物学功能[1-4]。桑树产品属于药食两用食品，但药食专用桑品种资源的缺乏严重制约了其开发和利用。因此，该试验对不同桑品种总黄酮含量进行测定，旨在筛选出具有较高药食开发价值的桑品种。
1 材料与方法
1.1 试验材料、仪器与试剂
1.1.1 材料。桑叶采于贵州省农科院蚕业研究所贵阳桑园基地，采集时间为2016年7月19—25日，采摘部位为桑树中部枝条叶片。采摘的桑叶用自来水冲洗，除去泥沙等杂物，再用双蒸水冲洗干净，风干后置于恒温鼓风干燥箱中，105 ℃杀青 5 min，然后在60 ℃恒温箱中烘至恒重，粉碎，过60 目筛，干燥桑叶粉分别装入密封袋备用。
1.1.2 仪器。鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；JH电子精密天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；多功能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；紫外/可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。
1.1.3 试剂。芦丁标准品（成都曼思特生物科技有限公司、中国科学院成都生物研究所共同研制）；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇均为分析纯试剂。
1.2 试验方法
1.2.1 标准曲线的绘制。准确称取芦丁标准品10.40 mg（120 ℃烘至恒重），置于50 mL容量瓶中，用50%乙醇溶解、定容，配制成芦丁标准溶液。分别准确吸取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO2溶液0.5 mL摇匀，放置5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再过5 min后再加入4 mL 4%NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度，以第一管溶液作为空白。以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线[5]。
1.2.2 桑叶中总黄酮的提取。精密称取桑叶粉1.000 g于100 mL锥形瓶中，加体积分数70%乙醇40 mL，在60 ℃条件下以420 W功率超声波提取40 min，过滤，将滤液转移至100 mL容量瓶，滤瓶用70%的乙醇洗涤3～5次，加70%乙醇定容至刻度，振荡摇匀为待测样品液[6]。
1.2.3 桑叶中总黄酮含量的测定。准确吸取待测样品液1 mL，放入10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO2溶液0.5 mL摇匀，放置 5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再过5 min后再加入4 mL的4% NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮含量。
总黄酮含量（mg/g）=■（1）
式（1）中，Y是吸光度值，V1是样品提取液定容体积（mL），V2是测定吸光度用样液的定容体积（mL），V3测定吸光度用样液的体积（mL），M 是样品质量（g）。
2 结果与分析
2.1 芦丁标准曲线和方程
以溶液质量浓度为X轴，吸光度为Y轴，制作标准曲线并得回归方程与回归系数（图1）。回归方程为Y=11.787X-0.003 1，计算得到回归系数R2=0.999 4。
2.2 不同品种对桑叶总黄酮含量变化的影响
不同品种桑叶分别经烘干、超声提取后，测得总黄酮含量见表1。60个品种的平均总黄酮含量为27.078 mg/g，品种间差异较大，变异系数为29%。其中，道真桑总黄酮含量最高，为52.269 mg/g，强桑1号总黄酮含量最低，仅为14.765 mg/g，其差异达3倍以上。
3 结论与讨论
植物中提取的黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗氧化、抗病原微生物、改善免疫功能、防治心血管疾病、改善繁殖性能、抗炎等作用[7]。桑树是黄酮类物质含量较高的树种之一，但其含量受桑品种、生长环境、桑叶部位等影响。在桑树药食开发过程中，桑品种应作为原材料选择的一个重要因素。
通过对60个品种桑叶中部叶位总黄酮含量进行测定，发现不同品种对桑叶总黄酮影响显著。60个桑品种的桑叶干物质中总黄酮含量在14.765～52.269 mg/g之间，平均含量为27.078 mg/g，其中道真桑总黄酮含量最高，为52.269 mg/g。此外，特优2号、澧桑24、川-16、镇湖总黄酮含量也很高，含量分别为44.874、44.687、43.919、40.965 mg/g。对各品种进行形态学及生物学特征调查发现，道真桑、特优2号、川-16树形直立、枝条长而直、节间距较短、产叶量多，表现出相对优势，因而具有较高的药食用途和开发利用价值[8]。
4 参考文献
[1] 郭小补，廖森泰，刘吉平，等.不同桑品种的桑叶总黄酮含量与体外抗氧化活性的相关性[J].蚕业科学，2008，34（3）：381-386.
[2] 柴建萍，谢道燕.不同桑树品种资源多酚及黄酮类物质测定[J].蚕桑通报，2007，38（3）：15-16.
[3] 李瑞雪，汪泰初，贾鸿英.桑叶活性成分、生物活性的研究及其开发应用进展[J].北方蚕业，2009，30（2）：1-3.
[4] 原爱红，黄哲，马俊，等.桑叶黄酮的提取及其降糖作用的研究[J].中国草药，2004，35（11）：52-56.
[5] 穆建峰.桑叶总黄酮提取工艺研究[J].中国果蔬，2016，36（8）：12-15.
[6] 郑梦娇，陈清西.响应面优化扶桑叶黄酮超声提取工艺[J].亚热带植物科学，2013，42（3）：205-210.
[7] 占今舜，刘明美，赵国琦.黄酮的作用及其在反刍动物上的应用[J].中国饲料，2014，23（4）：13-15.
[8] 王芳，乔璐，潘小艳，等.桑叶黄酮的提取及抗氧化研究[J].广东农业科学，2011（15）：76-79.
关键词 桑叶；品種；总黄酮；紫外分光光度法
中图分类号 R284 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）03-0223-01
长期以来，栽植桑树主要被用来养蚕，随着经济的不断发展，这种单纯的栽桑养蚕形式已不符合农业多元化发展趋势，随着科研人员对桑树研究的深入，桑叶的营养价值和药用价值已越来越引起人们的关注，黄酮类物质是桑叶发挥功效的主要活性成分之一，具有多种生物学功能[1-4]。桑树产品属于药食两用食品，但药食专用桑品种资源的缺乏严重制约了其开发和利用。因此，该试验对不同桑品种总黄酮含量进行测定，旨在筛选出具有较高药食开发价值的桑品种。
1 材料与方法
1.1 试验材料、仪器与试剂
1.1.1 材料。桑叶采于贵州省农科院蚕业研究所贵阳桑园基地，采集时间为2016年7月19—25日，采摘部位为桑树中部枝条叶片。采摘的桑叶用自来水冲洗，除去泥沙等杂物，再用双蒸水冲洗干净，风干后置于恒温鼓风干燥箱中，105 ℃杀青 5 min，然后在60 ℃恒温箱中烘至恒重，粉碎，过60 目筛，干燥桑叶粉分别装入密封袋备用。
1.1.2 仪器。鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）；JH电子精密天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；多功能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；紫外/可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。
1.1.3 试剂。芦丁标准品（成都曼思特生物科技有限公司、中国科学院成都生物研究所共同研制）；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙醇均为分析纯试剂。
1.2 试验方法
1.2.1 标准曲线的绘制。准确称取芦丁标准品10.40 mg（120 ℃烘至恒重），置于50 mL容量瓶中，用50%乙醇溶解、定容，配制成芦丁标准溶液。分别准确吸取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，置于10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO2溶液0.5 mL摇匀，放置5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再过5 min后再加入4 mL 4%NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度，以第一管溶液作为空白。以芦丁浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线[5]。
1.2.2 桑叶中总黄酮的提取。精密称取桑叶粉1.000 g于100 mL锥形瓶中，加体积分数70%乙醇40 mL，在60 ℃条件下以420 W功率超声波提取40 min，过滤，将滤液转移至100 mL容量瓶，滤瓶用70%的乙醇洗涤3～5次，加70%乙醇定容至刻度，振荡摇匀为待测样品液[6]。
1.2.3 桑叶中总黄酮含量的测定。准确吸取待测样品液1 mL，放入10 mL容量瓶中，分别加入5%的NaNO2溶液0.5 mL摇匀，放置 5 min后加入10% Al（NO3）3溶液0.5 mL，再过5 min后再加入4 mL的4% NaOH溶液，混匀，用50%乙醇稀释至刻度。放置15 min，在510 nm下测定吸光度。根据标准曲线计算总黄酮含量。
总黄酮含量（mg/g）=■（1）
式（1）中，Y是吸光度值，V1是样品提取液定容体积（mL），V2是测定吸光度用样液的定容体积（mL），V3测定吸光度用样液的体积（mL），M 是样品质量（g）。
2 结果与分析
2.1 芦丁标准曲线和方程
以溶液质量浓度为X轴，吸光度为Y轴，制作标准曲线并得回归方程与回归系数（图1）。回归方程为Y=11.787X-0.003 1，计算得到回归系数R2=0.999 4。
2.2 不同品种对桑叶总黄酮含量变化的影响
不同品种桑叶分别经烘干、超声提取后，测得总黄酮含量见表1。60个品种的平均总黄酮含量为27.078 mg/g，品种间差异较大，变异系数为29%。其中，道真桑总黄酮含量最高，为52.269 mg/g，强桑1号总黄酮含量最低，仅为14.765 mg/g，其差异达3倍以上。
3 结论与讨论
植物中提取的黄酮类化合物具有抗肿瘤、抗氧化、抗病原微生物、改善免疫功能、防治心血管疾病、改善繁殖性能、抗炎等作用[7]。桑树是黄酮类物质含量较高的树种之一，但其含量受桑品种、生长环境、桑叶部位等影响。在桑树药食开发过程中，桑品种应作为原材料选择的一个重要因素。
通过对60个品种桑叶中部叶位总黄酮含量进行测定，发现不同品种对桑叶总黄酮影响显著。60个桑品种的桑叶干物质中总黄酮含量在14.765～52.269 mg/g之间，平均含量为27.078 mg/g，其中道真桑总黄酮含量最高，为52.269 mg/g。此外，特优2号、澧桑24、川-16、镇湖总黄酮含量也很高，含量分别为44.874、44.687、43.919、40.965 mg/g。对各品种进行形态学及生物学特征调查发现，道真桑、特优2号、川-16树形直立、枝条长而直、节间距较短、产叶量多，表现出相对优势，因而具有较高的药食用途和开发利用价值[8]。
4 参考文献
[1] 郭小补，廖森泰，刘吉平，等.不同桑品种的桑叶总黄酮含量与体外抗氧化活性的相关性[J].蚕业科学，2008，34（3）：381-386.
[2] 柴建萍，谢道燕.不同桑树品种资源多酚及黄酮类物质测定[J].蚕桑通报，2007，38（3）：15-16.
[3] 李瑞雪，汪泰初，贾鸿英.桑叶活性成分、生物活性的研究及其开发应用进展[J].北方蚕业，2009，30（2）：1-3.
[4] 原爱红，黄哲，马俊，等.桑叶黄酮的提取及其降糖作用的研究[J].中国草药，2004，35（11）：52-56.
[5] 穆建峰.桑叶总黄酮提取工艺研究[J].中国果蔬，2016，36（8）：12-15.
[6] 郑梦娇，陈清西.响应面优化扶桑叶黄酮超声提取工艺[J].亚热带植物科学，2013，42（3）：205-210.
[7] 占今舜，刘明美，赵国琦.黄酮的作用及其在反刍动物上的应用[J].中国饲料，2014，23（4）：13-15.
[8] 王芳，乔璐，潘小艳，等.桑叶黄酮的提取及抗氧化研究[J].广东农业科学，2011（15）：76-79.