目的建立人血浆中万古霉素和去甲万古霉素游离浓度的离心超滤-高效液相色谱法。方法血样经离心超滤技术进行预处理。色谱柱:Diamonsil RP-C₁₈柱（4.6 mm×150 mm,5μm）,流动相:甲醇-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾缓冲液（pH 3.0）=20∶80;流速:1.0 m L·min^-1;柱温:30℃;检测波长:236 nm。考察该方法的专属性、标准曲线和定量下限、精密度与回收率、以及稳定性。结果血浆中游离的万古霉素和去甲万古霉素均在0.2⁵0.0μg·m L^-1内线性关系良好（r=0.999 8和0.999 9）,定量下限均为0.05μg·m L^-1,方法回收率分别为97.63%¹02.75%和99.35%¹01.82%,绝对回收率分别为95.41%⁹9.89%和91.61%⁹9.91%,批内、批间RSD均不大于5.0%,在室温放置24 h、冻融循环3次和冰冻21 d的稳定性良好。结论本方法简便准确,适宜于血浆中万古霉素和去甲万古霉素的游离浓度分析。