【摘 要】
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假阴性结果是影响核酸检测结果的主要因素之一.扩增内标(internal amplification control,IAC)在监控PCR过程中假阴性结果发挥着重要作用.为探索扩增内标在逆转录重组酶聚合
【机 构】
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湛江海关,湛江524022西宁海关,西宁810000;黄埔海关,广州510700;广州海关,广州510000;华中农业大学理学院,武汉430074;
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假阴性结果是影响核酸检测结果的主要因素之一.扩增内标(internal amplification control,IAC)在监控PCR过程中假阴性结果发挥着重要作用.为探索扩增内标在逆转录重组酶聚合酶常温扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,RT-RPA)检测过程中的应用,解决RT-RPA检测过程中的假阴性问题,本研究通过复合引物法人工构建了扩增内标,并应用于大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)及南方菜豆花叶病毒(Southern bean mo?saic virus,SBMV)三种大豆病毒RT-RPA检测过程.实验结果显示,所建立的方法能够实现目的基因特异性扩增的同时指示假阴性结果.灵敏度试验结果表明,当50μL反应体系中扩增内标添加量为1.83×104 copies时,该体系对SMV及BPMV的检测灵敏度为0.05 ng;扩增内标添加量为1.83×103 copies时,该体系对SBMV的检测灵敏度为0.05 ng.利用该方法对10批实际大豆(Glycine max)样品进行检测,与对应反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)结果一致,表明其具有良好的适用性.研究结果表明本方法可有效指示3种病毒RT-RPA检测过程中的假阴性,提高检测结果的可信度,为相关产品的监管提供技术支持和参考依据.
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