【摘 要】
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目的建立一种体外纯化及培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的简便有效方法。方法全骨髓法分离培养SD大鼠MSCs,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增MSCs目的。倒置显微
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目的建立一种体外纯化及培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的简便有效方法。方法全骨髓法分离培养SD大鼠MSCs,通过体外培养和连续传代达到纯化和扩增MSCs目的。倒置显微镜下观察细胞形态变化情况;利用四唑盐比色(MTT)法测定MSCs的生长曲线;流式细胞仪(FCM)鉴定MSCs膜抗原。结果 SD大鼠胫骨全骨髓细胞在分离后与含10%优质胎牛血清DMEM培养基混合,约5~10min后即可见大量有核细胞贴壁,细胞形态为圆形,24~48h后可见贴壁细胞转变为椭圆形、多角形及短梭形,7~12d时细胞呈长梭形并达到90%单层融合。通过传代细胞进一步纯化及扩增。细胞传代后2d内处于潜伏期,3d后进入生长期,5d后进入平台期。FCM检测第4代MSCs膜表面抗原CD45、CD90、CD29阳性率分别为1.50%、99.18%、97.70%。结论 SD大鼠全骨髓贴壁法能有效得到分离纯化的MSCs,用此方法培养的SD大鼠MSCs生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,可以为组织工程提供理想的种子细胞。为本实验研究打下基础。
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