【摘 要】
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人工酵母染色体(YAC)可以克隆和分析大片段的染色体DNA,并且可以分离那些在大肠杆菌(Escherichia coli)中不可能得到的序列.实验将His.5基因插入到一个Ura3基因的中间,构建了
【机 构】
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中国农业大学农业生物技术国家实验室,北京,100094Laboratory of Genetic and Developmental Immunology,The Babraham Institute
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人工酵母染色体(YAC)可以克隆和分析大片段的染色体DNA,并且可以分离那些在大肠杆菌(Escherichia coli)中不可能得到的序列.实验将His.5基因插入到一个Ura3基因的中间,构建了一个新的质粒pLRH33,从而打断了Ura3基因使之不能表达.利用His.5基因两端各留下的部分Ura3基因片段,同源重组到YAC臂上原有的Ura3基因中,使重组后的YAC的标记性状从Ura+ His-变成了His+Ura.用质粒pLRH33的5.5kb线性片段以一定比例和需要重组到YAC上的目的基因pBAC300的50kb片段相混合,同时作酵母菌转化,在His-Ura+培养基上得到大量带His5基因的阳性克隆.在检测的1 200个克隆中,有250个目的基因阳性克隆,占受检克隆的22.5%.表明质粒pLRH33可以有效地用作YAC重组的筛选标记.
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