探讨高尔基磷酸化蛋白3(GOLPH3)基因过表达对人结肠癌细胞HT29顺铂化疗敏感性的影响及其机制。
方法将HT29细胞分为4组：对照组(HT29)、转染组[小干扰RNA(siRNA)-GOLPH3]、实验组1(10 μmol/L顺铂)、实验组2(siRNA-GOLPH3＋10 μmol/L顺铂)。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测人结肠癌细胞转染后的沉默效果。噻唑蓝(MTT)、瘤球形成实验、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)流式细胞实验分别检测各组细胞增殖、成瘤、凋亡。Western blot检测各组细胞GOLPH3、P-糖蛋白(P-gp)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。裸鼠随机分为4组，分别为裸鼠对照组(HT29＋NS)、裸鼠转染组(siRNA-GOLPH3 HT29＋NS)、裸鼠实验组1(HT29＋顺铂)及裸鼠实验组2(siRNA-GOLPH3 HT29＋顺铂)，观察30 d内成瘤。
结果与对照组比较，转染组细胞中的GOLPH3 mRNA和蛋白的相对表达量明显降低(1.002±0.223比0.162±0.062；1.003±0.094比0.099±0.112)(P<0.01)，凋亡率明显升高[(1.843±1.298)%比(15.520±2.921)%，P<0.01]。在顺铂处理条件下，实验组2的A值(0.236±0.071)及瘤球数[(30.750±14.500)%]明显低于实验组1(0.746±0.085、212.800±30.380)，而凋亡率明显高于实验组1[(59.400±2.392)%比(23.890±6.363)%，P<0.01]。裸鼠实验中转染组、实验组1、实验组2裸鼠腋窝皮下移植瘤体的体积均显著低于对照组[(1.738±0.121)、(1.573±0.224)、(0.625±0.189) mm3比(2.083±0.110) mm3]，差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组1裸鼠自15 d后其瘤体体积均大于同期实验组2裸鼠的瘤体体积(P<0.01)。与对照组比较，实验组1的GOLPH3、β-catenin、P-gp蛋白表达量同步升高(1.000±0.173比2.734±0.440，1.000±0.078比2.472±0.444，1.014±0.346比4.269±0.454)(P<0.01)。实验组2的GOLPH3、β-catenin、P-gp的蛋白表达水平较实验组1均明显降低(0.249±0.084比2.734±0.440；0.993±0.052比2.472±0.444；1.842±0.383比4.269±0.454)(P<0.01)。
结论GOLPH3基因过表达可通过激活Wnt/β-catenin细胞信号通路降低HT29结肠癌细胞对顺铂化疗的敏感度。