双重荧光数字PCR方法定量检测贝类中诺如病毒

来源 :食品安全质量检测学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kzhengting
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目的 建立双重荧光微滴式数字反转录聚合酶链式反应(microdrop digital reverse transcription polymerase chain reaction,RT-ddPCR)法定量检测贝类样品中诺如病毒.方法 确定RT-ddPCR方法的最佳退火温度和探针浓度,建立贝类中诺如病毒双重荧光数字PCR检测方法,并定量检测秦皇岛2015~2017年7月采集的贝类样品中的诺如病毒.结果 贝类中诺如病毒RT-ddPCR检测方法线性范围为5×104~5×100 copy/μL,检出限为1.0 copy/20μL的反应体系.用数字PCR方法检出秦皇岛贝类样品中诺如病毒总阳性率为67%,GⅠ型病毒平均浓度为8.70×102 copy/g消化腺,GⅡ型病毒平均浓度为1.04×103 copy/g消化腺.结论 与荧光定量反转录聚合酶链式反应(fluorescence quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法相比,数字PCR方法在检测贝类诺如病毒时有明显优势,能提高病毒检出率,不依赖标准品进行绝对定量.
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