【摘 要】
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目的 探讨蛋白激酶B(Akt)对Eca109细胞生物学功能的影响及其与血管生成拟态(VM)相关基因表达的关系.方法 应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色
【机 构】
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徐州医学院附属淮安市第二人民医院呼吸科,徐州医学院附属连云港市第一人民医院消化科,南京医科大学第一附属医院消化科
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目的 探讨蛋白激酶B(Akt)对Eca109细胞生物学功能的影响及其与血管生成拟态(VM)相关基因表达的关系.方法 应用倒置荧光显微镜观察Akt的干扰质粒转染食管癌细胞Eca109后绿色荧光蛋白的表达；平板克隆形成实验检测转染前后细胞增殖能力的变化；Transwell方法检测干扰前后细胞迁移能力的变化；三维培养观察并计数转染前后各组细胞的管状结构数量；将Eca109(未转染组)、Eca109/Neo(空载体组)、Eca109/小干扰RNA(siRNA) Akt细胞(稳定转染组)培养后检测细胞凋亡率,了解抑制Akt基因对细胞凋亡的影响；以Western印迹检测各株细胞中Akt蛋白与基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因蛋白表达的关系.结果 Western印迹结果显示稳定转染组Akt蛋白表达低于空载体组及未转染组(0.03 ±0.01比1.49 ±0.39和1.47 ±0.41,均P＜0.05).Transwell实验结果,稳定转染组穿过人工膜的细胞数明显少于空载体组与未转染组[(48±9)比(122±11)和(128 ±10)个,均P＜0.05]；稳定转染组的克隆形成数目显著低于空载体组及未转染组[(63±7)比(148±11)和(163±15)个,均P＜0.05].流式细胞仪以膜联蛋白V/AAD双标法显示稳定转染组凋亡率高于空载体组与未转染组(12.2％±1.6％比4.2％±0.8％和4.8％±0.8％,均P＜0.05).空载体组及未转染组在基质胶上均能形成典型的血管网状样结构,稳定转染组管状结构数目明显少于未转染组与空载体组[(14.0±1.2)比(30.0±1.2)和(27.7±1.5)个,均P＜0.05]；稳定转染组MMP-2蛋白表达均低于未转染组及空载体组(均P＜0.05).结论 磷脂酰肌醇三磷酸激酶( PI3 K)/Akt通路参与调控了食管鳞癌VM的形成,可能是PI3K/Akt通路通过调节MMP-2来影响食管癌细胞VM的形成.阻断Akt通路有可能成为治疗人食管鳞癌的新靶点.
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