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摘要：为开发环境友好型生物杀虫剂，找到一种生物防治花斑皮蠹的方法，利用白毒鹅膏菌和烟草的毒素粗品对花斑皮蠹幼虫进行诱杀试验。结果表明：白毒鹅膏菌复合烟草的毒素粗品对花斑皮蠹幼虫有一定的诱杀作用，并表现出明显的剂量效应。施药后5 d，烟草提取物对花斑皮蠹幼虫的平均引诱率达40%以上，效果明显；在3种大型真菌毒素粗品中，白毒鹅膏菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒杀效果最明显；白毒鹅膏菌复合烟草毒素粗品的诱杀效果随着白毒鹅膏菌毒素浓度的增大而越来越明显，且二者具有协同作用。当浓度达到12%时，花斑皮蠹幼虫的诱杀率为7925%，效果显著。说明作为一种生物源复合杀虫剂的白毒鹅膏菌复合烟草的毒素粗品防治花斑皮蠹幼虫效果显著。
关键词：白毒鹅膏菌；烟草；花斑皮蠹；毒素粗品；生物防治
中图分类号： S433.5文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）09-0175-02
花斑皮蠹（Trogoderma variabile）属鞘翅目（Coleoptera）皮蠹科（Dermestidae）昆虫，是世界性的储藏物害虫，主要危害粮食、织物、电缆、家居装潢材料及动植物标本，少数传播动物炭疽杆菌和微粒子病等[1]。其幼虫破坏性大，活动隐蔽，耐寒、耐热、耐饿，繁殖力强，是斑皮蠹属在国内分布最广、危害最严重的种类；加之其隐藏于蛀成“隧道”的贮藏物中难以发现，也给其防治带来了不小的难题。目前，对花斑皮蠹的防治主要使用化学药物，由于杀虫剂的抗性及生态环境和食品安全问题，使大型真菌源农药的研究开发具有重要的意义。白毒鹅膏菌为常见毒菌，但它对花斑皮蠹是否有活性鲜为人知，与植物源毒素粗品复合使用杀虫国内外尚无报道。因此，本研究用上述材料研究其对花斑皮蠹幼虫的活性，为大型真菌复合植物源诱杀剂的研发和花斑皮蠹的防治提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试虫体花斑皮蠹幼虫捕捉于辽宁省沈阳市木材加工场，由中国科学院动物研究所王剑锋博士鉴定。以木料、麦麸为饲料饲养，温度26～28 ℃，相对湿度70%～80%，自然光照。试验选取3～4龄幼虫。
1.1.2供试菌种白毒鹅膏菌、白黄盖鹅膏菌、红网牛肝菌，采自辽宁省本溪市五女山、沈阳市棋盘山风景区、鞍山市千山风景区。参照相关资料[2-3]，经辽宁省农业科学院食用菌研究所刘俊杰研究员鉴定。
1.1.3供试植物马尾松（Pinus massoniana Lamb.）、鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb.）、茉莉花[Jasminum sambac （L.） Ait]、烟草（Nicotiana tabacum L.）、侧柏[Platy cladusorentalis （L.） Franco]，购自国大药房中药店，分别将上述植物材料洗净，放入烘箱中于50 ℃烘干，用电动粉碎机粉碎，过40目筛后密封备用。
1.1.4试验仪器与设备FA-2004精密电子天平，LDZX-75KBS立式压力蒸汽灭菌器，PRX-205B智能人工气候箱，SW-CJ-2F（D）型医用净化工作台，JY99-2D超声波细胞粉碎机，GL-161X箱式高速冷冻离心机，BS-1EH数显振荡培养箱，F160电动粉碎机，R-215旋转蒸发仪，DHG-9146A鼓风干燥箱。
1.2方法
1.2.1毒素粗品的制备将采集的3种大型真菌的子实体分别进行固体菌种扩繁，接种于PDA液体培养基中，于26 ℃液体发酵摇床上培养7 d，再进行超声波细胞破碎、离心，取上清液，进行旋转蒸发浓缩，浓缩液经40 ℃恒温干燥，得毒素粗品[4-6]。毒素粗品分别溶解于不同体积的无离子水中，用超声波破碎，再3 000 r/min离心制成浓度为2%、5%、8%、10%、12%的上清液。
1.2.2植物提取物的制备用电子天平分别称取植物干粉各30 g，加入无水乙醇120 mL，25 ℃下120 r/min振荡培养24 h，过滤，无水乙醇定容至100 mL，所得即为浓度为 0.3 g/mL的提取液（1 mL含有0.3 g植物干粉粗提物）。
1.2.3植物提取物对花斑皮蠹幼虫的引诱性筛选引诱试验采用滤纸药膜法[7]。将直径为9 cm的培养皿洗净、烘干，把直径为9 cm的圆形滤纸对半剪开，其中一半在0.3 g/mL植物提取液中浸渍5 min，另一半在无水乙醇中浸渍5 min。待乙醇自然挥发后，用透明胶带将对应的两半处理过的滤纸粘在一起，用固体胶将粘贴后的滤纸固定在培养皿底部，接入花斑皮蠢4龄幼虫20头/皿，使其自然分散，放入木料、麦麸正常饲养，盖上皿盖，放入26～28 ℃、相对湿度70%～80%、无光照的培养箱中。设A1（侧柏）、A2（烟草）、A3（马尾松）、A4（鱼腥草）、A5（茉莉花）组；另取直径为9 cm的培养皿，其中只放入木料、麦麸作为空白对照（A0）组；接虫后每12 h检查1次，2 d后每24 h检查1次两半滤纸上的幼虫分布情况。
1.2.4真菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒性筛选取10%上清液与木料、麦麸按1 ∶5的比例混合分布于直径为 9 cm 的培养皿内，接入花斑皮蠢4龄幼虫20头/皿，使其自然分散，盖上皿盖，试验条件同“1.2.3”节。设B1（白毒鹅膏菌）、B2（白黄盖鹅膏菌）、B3（红网牛肝菌）组；另取直径为 9 cm的培养皿，其中只放入木料、麦麸作为空白对照（B0）组；观察花斑皮蠹幼虫生长情况，5 d后记录死亡数。
1.2.5不同浓度的白毒鹅膏菌复合烟草毒素粗品诱杀效应的测定将筛选出的0.3 g/mL烟草提取液分别与2%、5%、8%、10%、12%白毒鹅膏菌上清液混合，与木料、麦麸混合，并分别取20头花斑皮蠹幼虫放入直径为9 cm的培养皿中，试验条件同“1.2.3”节。设C1（2%）、C2（5%）、C3（8%）、C4（10%）、C5（12%）组；另取直径为9 cm的培养皿，其中只放入木料、麦麸作为空白对照（C0）组；观察花斑皮蠹幼虫存活情况，5 d后记录诱杀数。 1.2.6数据处理 （1）引诱率计算。引诱率=（对照边虫数-处理边虫数）/对照边虫数×100%；平均引诱率=同一引诱材料各次检查时的引诱率之和/检查次数。（2）死亡率计算。死亡率=死亡虫数/总虫数×100%；平均死亡率=同一触杀材料各次检查时的死亡率之和/检查次数；校正死亡率=（处理组死亡率-对照组死亡率）/（1-对照组死亡率）×100%。（3）诱杀率计算。诱杀率=（引诱处理边死亡虫数/总虫数）×100%。（4）统计分析。采用DPS 2000软件对试验数据进行LSD分析。
2结果与分析
2.1植物提取物粗品对花斑皮蠹幼虫的引诱性筛选
由表1可知，5种植物的提取液对花斑皮蠢幼虫均具有一定的引诱作用，处理3 d后引诱效果均有明显的下降趋势。其中，烟草的提取液对幼虫的引诱作用最强，烟草提取液处理后3 d内引诱率一直保持在75%以上，4 d内保持在40%以上。鱼腥草提取液在处理后2 d内引诱率也在80%以上，但随后急剧下降。茉莉花提取液在处理后2 d内引诱率在70%以上，但3 d后迅速降到30%以下。侧柏和马尾松的提取液表现出的引诱活性较差，除马尾松提取液在12 h的引诱率达到70%以上外，其余均在65%以下。表15种植物粗品毒效试验中花斑皮蠹幼虫的引诱情况
2.2真菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒性筛选
由表2可知，在大型真菌毒素粗品的毒性筛选试验中，白毒鹅膏菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫有明显的致死效应。此外，白黄盖鹅膏菌和红网牛肝菌也表现出轻微的毒性，但效率较低，致死效应重复性较差，因此笔者只对致死效应最好的白毒鹅膏菌进行研究。
2.3白毒鹅膏菌烟草复合粗品对花斑皮蠹幼虫诱杀效应的测定
由表3可知，在不同浓度的白毒鹅膏菌复合烟草毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒效试验中，当烟草粗品浓度一定时，随着白毒鹅膏菌毒素粗品浓度的增大，对花斑皮囊幼虫的诱杀效果越来越明显，当浓度达到12%时，平均诱杀率达到了79.25%，效果显著。
3结论与讨论
大型真菌杀虫剂和植物源杀虫剂由于其独特的优势，在害虫防治上越来越受关注，其诱杀效率高，对人畜无害，无药物残留，不污染环境。用植物提取物将花斑皮蠹引诱到有毒蕈粗品的场所，使花斑皮蠹接触或食用致死，能达到以菌治虫的目的[8-9]。有研究表明，白毒鹅膏菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒杀效果明显，与0.3 g/mL烟草毒素粗品联合使用且浓度达到12%时，平均诱杀率达到79.25%，是一种诱杀效果较理想的生物源杀虫剂，具有广阔的前景和利用空间，探索最佳诱杀虫模式是降低生产成本、保障农业发展的重要措施。
今后还应该深入研究不同使用方法和不同发育阶段的生物活性等方面，为大型真菌复合植物源诱杀剂的进一步开发和利用提供理论依据。
参考文献：
[1]邓天福，王霞.两种防蛀剂对花斑皮蠹的熏蒸活性研究[J]. 河南科技学院学报：自然科学版，2013，6（6）：18-20.
[2]卯晓岚.中国大型真菌[M]. 郑州：河南科学技术出版社，2000：1-17.
[3]图力古尔，包海鹰，李玉. 中国毒蘑菇名录[J]. 菌物学报，2014（3）：517-548.
[4]张扬，赵阳，范克胜，等. 红绒盖牛肝菌发酵培养基筛选及液体培养条件[J]. 林业科技开发，2013，27（4）：111-114.
[5]陈琳，孟美娇，杨绍斌，等. 豹斑毒鹅膏菌液体培养及产物毒性的初步研究[J]. 贵州农业科学，2011，39（10）：93-96.
[6]汪梦筱，王伟，汪维云.羊肚菌液体深层发酵工艺优化研究[J]. 包装与食品机械，2014（1）：15-18.
[7]毛宁，丁珊珊，余宗钟.裸盖菇L-001菌株液体培养及其产毒素初探[J]. 福建师范大学学报：自然科学版，2009，25（6）：77-81.
[8]王霞，范腕腕，邓天福.四种植物精油对花斑皮蠹的熏蒸作用[J]. 河南科技学院学报：自然科学版，2013，3（3）：75-78.
[9]邓天福，姜雪晓.大蒜生姜提取物对花斑皮蠹幼虫的驱避作用[J]. 河南科技学院学报：自然科学版，2011，39（1）：47-50.王丰，郭道友，范余娟. 毒蝇鹅膏菌有效成分的提取工艺及抗菌特性[J]. 江苏农业科学，2015，43（9）：177-179.
关键词：白毒鹅膏菌；烟草；花斑皮蠹；毒素粗品；生物防治
中图分类号： S433.5文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）09-0175-02
花斑皮蠹（Trogoderma variabile）属鞘翅目（Coleoptera）皮蠹科（Dermestidae）昆虫，是世界性的储藏物害虫，主要危害粮食、织物、电缆、家居装潢材料及动植物标本，少数传播动物炭疽杆菌和微粒子病等[1]。其幼虫破坏性大，活动隐蔽，耐寒、耐热、耐饿，繁殖力强，是斑皮蠹属在国内分布最广、危害最严重的种类；加之其隐藏于蛀成“隧道”的贮藏物中难以发现，也给其防治带来了不小的难题。目前，对花斑皮蠹的防治主要使用化学药物，由于杀虫剂的抗性及生态环境和食品安全问题，使大型真菌源农药的研究开发具有重要的意义。白毒鹅膏菌为常见毒菌，但它对花斑皮蠹是否有活性鲜为人知，与植物源毒素粗品复合使用杀虫国内外尚无报道。因此，本研究用上述材料研究其对花斑皮蠹幼虫的活性，为大型真菌复合植物源诱杀剂的研发和花斑皮蠹的防治提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1供试虫体花斑皮蠹幼虫捕捉于辽宁省沈阳市木材加工场，由中国科学院动物研究所王剑锋博士鉴定。以木料、麦麸为饲料饲养，温度26～28 ℃，相对湿度70%～80%，自然光照。试验选取3～4龄幼虫。
1.1.2供试菌种白毒鹅膏菌、白黄盖鹅膏菌、红网牛肝菌，采自辽宁省本溪市五女山、沈阳市棋盘山风景区、鞍山市千山风景区。参照相关资料[2-3]，经辽宁省农业科学院食用菌研究所刘俊杰研究员鉴定。
1.1.3供试植物马尾松（Pinus massoniana Lamb.）、鱼腥草（Houttuynia cordata Thunb.）、茉莉花[Jasminum sambac （L.） Ait]、烟草（Nicotiana tabacum L.）、侧柏[Platy cladusorentalis （L.） Franco]，购自国大药房中药店，分别将上述植物材料洗净，放入烘箱中于50 ℃烘干，用电动粉碎机粉碎，过40目筛后密封备用。
1.1.4试验仪器与设备FA-2004精密电子天平，LDZX-75KBS立式压力蒸汽灭菌器，PRX-205B智能人工气候箱，SW-CJ-2F（D）型医用净化工作台，JY99-2D超声波细胞粉碎机，GL-161X箱式高速冷冻离心机，BS-1EH数显振荡培养箱，F160电动粉碎机，R-215旋转蒸发仪，DHG-9146A鼓风干燥箱。
1.2方法
1.2.1毒素粗品的制备将采集的3种大型真菌的子实体分别进行固体菌种扩繁，接种于PDA液体培养基中，于26 ℃液体发酵摇床上培养7 d，再进行超声波细胞破碎、离心，取上清液，进行旋转蒸发浓缩，浓缩液经40 ℃恒温干燥，得毒素粗品[4-6]。毒素粗品分别溶解于不同体积的无离子水中，用超声波破碎，再3 000 r/min离心制成浓度为2%、5%、8%、10%、12%的上清液。
1.2.2植物提取物的制备用电子天平分别称取植物干粉各30 g，加入无水乙醇120 mL，25 ℃下120 r/min振荡培养24 h，过滤，无水乙醇定容至100 mL，所得即为浓度为 0.3 g/mL的提取液（1 mL含有0.3 g植物干粉粗提物）。
1.2.3植物提取物对花斑皮蠹幼虫的引诱性筛选引诱试验采用滤纸药膜法[7]。将直径为9 cm的培养皿洗净、烘干，把直径为9 cm的圆形滤纸对半剪开，其中一半在0.3 g/mL植物提取液中浸渍5 min，另一半在无水乙醇中浸渍5 min。待乙醇自然挥发后，用透明胶带将对应的两半处理过的滤纸粘在一起，用固体胶将粘贴后的滤纸固定在培养皿底部，接入花斑皮蠢4龄幼虫20头/皿，使其自然分散，放入木料、麦麸正常饲养，盖上皿盖，放入26～28 ℃、相对湿度70%～80%、无光照的培养箱中。设A1（侧柏）、A2（烟草）、A3（马尾松）、A4（鱼腥草）、A5（茉莉花）组；另取直径为9 cm的培养皿，其中只放入木料、麦麸作为空白对照（A0）组；接虫后每12 h检查1次，2 d后每24 h检查1次两半滤纸上的幼虫分布情况。
1.2.4真菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒性筛选取10%上清液与木料、麦麸按1 ∶5的比例混合分布于直径为 9 cm 的培养皿内，接入花斑皮蠢4龄幼虫20头/皿，使其自然分散，盖上皿盖，试验条件同“1.2.3”节。设B1（白毒鹅膏菌）、B2（白黄盖鹅膏菌）、B3（红网牛肝菌）组；另取直径为 9 cm的培养皿，其中只放入木料、麦麸作为空白对照（B0）组；观察花斑皮蠹幼虫生长情况，5 d后记录死亡数。
1.2.5不同浓度的白毒鹅膏菌复合烟草毒素粗品诱杀效应的测定将筛选出的0.3 g/mL烟草提取液分别与2%、5%、8%、10%、12%白毒鹅膏菌上清液混合，与木料、麦麸混合，并分别取20头花斑皮蠹幼虫放入直径为9 cm的培养皿中，试验条件同“1.2.3”节。设C1（2%）、C2（5%）、C3（8%）、C4（10%）、C5（12%）组；另取直径为9 cm的培养皿，其中只放入木料、麦麸作为空白对照（C0）组；观察花斑皮蠹幼虫存活情况，5 d后记录诱杀数。 1.2.6数据处理 （1）引诱率计算。引诱率=（对照边虫数-处理边虫数）/对照边虫数×100%；平均引诱率=同一引诱材料各次检查时的引诱率之和/检查次数。（2）死亡率计算。死亡率=死亡虫数/总虫数×100%；平均死亡率=同一触杀材料各次检查时的死亡率之和/检查次数；校正死亡率=（处理组死亡率-对照组死亡率）/（1-对照组死亡率）×100%。（3）诱杀率计算。诱杀率=（引诱处理边死亡虫数/总虫数）×100%。（4）统计分析。采用DPS 2000软件对试验数据进行LSD分析。
2结果与分析
2.1植物提取物粗品对花斑皮蠹幼虫的引诱性筛选
由表1可知，5种植物的提取液对花斑皮蠢幼虫均具有一定的引诱作用，处理3 d后引诱效果均有明显的下降趋势。其中，烟草的提取液对幼虫的引诱作用最强，烟草提取液处理后3 d内引诱率一直保持在75%以上，4 d内保持在40%以上。鱼腥草提取液在处理后2 d内引诱率也在80%以上，但随后急剧下降。茉莉花提取液在处理后2 d内引诱率在70%以上，但3 d后迅速降到30%以下。侧柏和马尾松的提取液表现出的引诱活性较差，除马尾松提取液在12 h的引诱率达到70%以上外，其余均在65%以下。表15种植物粗品毒效试验中花斑皮蠹幼虫的引诱情况
2.2真菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒性筛选
由表2可知，在大型真菌毒素粗品的毒性筛选试验中，白毒鹅膏菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫有明显的致死效应。此外，白黄盖鹅膏菌和红网牛肝菌也表现出轻微的毒性，但效率较低，致死效应重复性较差，因此笔者只对致死效应最好的白毒鹅膏菌进行研究。
2.3白毒鹅膏菌烟草复合粗品对花斑皮蠹幼虫诱杀效应的测定
由表3可知，在不同浓度的白毒鹅膏菌复合烟草毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒效试验中，当烟草粗品浓度一定时，随着白毒鹅膏菌毒素粗品浓度的增大，对花斑皮囊幼虫的诱杀效果越来越明显，当浓度达到12%时，平均诱杀率达到了79.25%，效果显著。
3结论与讨论
大型真菌杀虫剂和植物源杀虫剂由于其独特的优势，在害虫防治上越来越受关注，其诱杀效率高，对人畜无害，无药物残留，不污染环境。用植物提取物将花斑皮蠹引诱到有毒蕈粗品的场所，使花斑皮蠹接触或食用致死，能达到以菌治虫的目的[8-9]。有研究表明，白毒鹅膏菌毒素粗品对花斑皮蠹幼虫的毒杀效果明显，与0.3 g/mL烟草毒素粗品联合使用且浓度达到12%时，平均诱杀率达到79.25%，是一种诱杀效果较理想的生物源杀虫剂，具有广阔的前景和利用空间，探索最佳诱杀虫模式是降低生产成本、保障农业发展的重要措施。
今后还应该深入研究不同使用方法和不同发育阶段的生物活性等方面，为大型真菌复合植物源诱杀剂的进一步开发和利用提供理论依据。
参考文献：
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[8]王霞，范腕腕，邓天福.四种植物精油对花斑皮蠹的熏蒸作用[J]. 河南科技学院学报：自然科学版，2013，3（3）：75-78.
[9]邓天福，姜雪晓.大蒜生姜提取物对花斑皮蠹幼虫的驱避作用[J]. 河南科技学院学报：自然科学版，2011，39（1）：47-50.王丰，郭道友，范余娟. 毒蝇鹅膏菌有效成分的提取工艺及抗菌特性[J]. 江苏农业科学，2015，43（9）：177-179.