【摘 要】
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比较检测新型嵌合抗原受体(CAR)的5种方法.通过慢病毒感染得到稳定表达嵌合抗原受体的细胞.使用免疫球蛋白G抗体染色、蛋白质L染色、绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法5种方法检测不同嵌合抗原受体在Jurkat细胞中的表达.成功构建6种CAR慢病毒表达载体(Meso-CAR、Met-CAR、R132H-CAR1-2-GFP、R132H-CAR2-4-GFP、Dupixent-HL-CAR-GFP、Dupixent-LH-CAR-GFP),并得到其对应的CAR稳定表达Jurkat细
【机 构】
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上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240
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比较检测新型嵌合抗原受体(CAR)的5种方法.通过慢病毒感染得到稳定表达嵌合抗原受体的细胞.使用免疫球蛋白G抗体染色、蛋白质L染色、绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法5种方法检测不同嵌合抗原受体在Jurkat细胞中的表达.成功构建6种CAR慢病毒表达载体(Meso-CAR、Met-CAR、R132H-CAR1-2-GFP、R132H-CAR2-4-GFP、Dupixent-HL-CAR-GFP、Dupixent-LH-CAR-GFP),并得到其对应的CAR稳定表达Jurkat细胞.发现Meso-CAR和Met-CAR可同时用免疫球蛋白G抗体和蛋白质L染色鉴定其表达(免疫球蛋白G抗体染色效果较优),而其余4种CAR均不可以.对荧光法染色不可行的CAR可使用绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法间接检测CAR的表达,3种方法的结果之间存在一定的对应性.不同的CAR分子,可用不同方法确定细胞中CAR分子的表达情况.
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[目的]探讨磷脂酰肌醇3-激酶亚单位p110β(PI3K/p110β)和PTEN基因在前列腺癌中的表达.[方法]收集绵阳市中心医院2016年1月～2020年1月经手术切除的前列腺癌标本80例,取新鲜癌组织及癌旁组织作为实验样本.用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测癌及癌旁组织PI3K/p110β及PTEN基因相对表达量.[结果]前列腺癌标本中PBK/p110β mRNA及PTEN mRNA相对表达量分别为4.124±0.194及3.039±0.098,而癌旁组织中PI3K/p110β mRNA及PT
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有丝分裂是真核生物细胞遗传和增殖发育的基础,主要分为S期和M期,其中M期是细胞分裂和遗传物质传递的重要过程.染色体的正确分离受到多种细胞机制的高度调控,是保证子代细胞遗传信息完整性的关键.本文主要以典型的真核生物酵母细胞为研究模型,综述了酵母在有丝分裂过程中染色体分离异常形成非整倍体的具体机制.分别包括纺锤体组装监控机制失效、姐妹染色单体黏结蛋白缺陷、动粒-纺锤体微管结合错误和多中心体途径4个方面.并讨论了非整倍体现象对酵母细胞造成的影响,以期更好的理解非整倍体酵母的生理及遗传特性.
[目的]分析纳武利尤单抗联合来那度胺对EGFR敏感性突变肺癌细胞PD1/PD-L1信号通路表达及T细胞增殖的影响.[方法]常规复苏EGFR敏感性突变细胞株PC9、HCC827,野生型A549、H1299肺癌细胞,分离健康人群外周血的T细胞,建立共培养体系,采用酶联免疫吸附法检测PD-L1表达和T淋巴细胞增殖.[结果]来那度胺联合纳武利尤单抗处理EGFR突变肺癌细胞株PC9,HCC827Spd-L1蛋白表达水平显著低于单独使用来那度胺细胞[(0.83±0.02)比(0.46 ±0.05),(1.13±1.1
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溶酶体是真核细胞内发挥降解功能的主要细胞器,它的功能异常与多种疾病密切相关.综述溶酶体与神经退行性疾病相关的研究进展,并重点从溶酶体酶、溶酶体pH调控和V-ATPase、溶酶体膜蛋白、溶酶体的细胞内定位等方面阐述溶酶体功能异常与神经退行性疾病的关系,为理解神经退行性疾病的机制提供新的视角,同时展望以溶酶体为靶点进行神经退行性疾病治疗和药物开发的广阔前景.
[目的]旨在快速优化双特异性抗体细胞培养工艺参数,提高蛋白表达量,改善产品关键质量属性.[方法]应用确定性筛选实验设计研究工艺参数(接种密度、培养温度和流加策略)对细胞生长、蛋白表达及关键质量属性(电荷异质性、聚体和高甘露糖型)的影响,利用一步法找出最佳工艺条件,然后放大至2L生物反应器进行工艺验证.[结果]应用JMP软件对实验数据拟合分析找出了最佳工艺条件,接种密度:(1.3±0.2)×106 cells/mL,培养温度:36.5±0.5℃,补料策略:第3d、13 d流加初始培养体积3％,第5d、7d、
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