【摘 要】
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目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)的磷酸化状态对ASPP2/p53凋亡通路活性的影响.方法 结肠癌HCT116细胞分别转染野生型ASPP2表达质粒(Aw)和非磷酸化突变型ASPP2质粒(Am),使细胞过表达野生型和非磷酸化突变型ASPP2蛋白.以奥沙利铂诱导HCT116细胞凋亡.annexin V/PI双染细胞后,以流式细胞术分析HCT116细胞的凋亡水平.Western blot法检测
【机 构】
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目的 探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)的磷酸化状态对ASPP2/p53凋亡通路活性的影响.方法 结肠癌HCT116细胞分别转染野生型ASPP2表达质粒(Aw)和非磷酸化突变型ASPP2质粒(Am),使细胞过表达野生型和非磷酸化突变型ASPP2蛋白.以奥沙利铂诱导HCT116细胞凋亡.annexin V/PI双染细胞后,以流式细胞术分析HCT116细胞的凋亡水平.Western blot法检测HCT116细胞中ASPP2蛋白的表达量和磷酸化状态.免疫共沉淀法检测ASPP2蛋白与p53的结合情况.结果 奥沙利铂能诱导HCT116结肠癌细胞凋亡以及ASPP2 ser92和ser361两个位点发生磷酸化.Aw和Am质粒转染的p53+/+HCT116细胞的凋亡率分别为(3.8±1.0)％和(3.9±1.2)％,与绿色荧光蛋白(GFP)质粒转染的p53+/+HCT116细胞的凋亡率[(4.0±0.8)％]差异无统计学意义(P＞0.05).但经过奥沙利铂处理后,Aw质粒转染的p53+/+HCT116细胞的凋亡率为(46.7±3.9)％,明显高于Am和GFP质粒转染的p53+/+HCT116细胞[分别为(40.1±10.2)％和(37.1±6.9)％,P＜0.05],而Am和GFP质粒转染组p53+/+HCT116细胞的凋亡率差异无统计学意义(P＞0.05).磷酸化的ASPP2通过p53依赖途径促进奥沙利铂诱导的HCT116细胞凋亡,而ASPP2的磷酸化状态影响其与p53的结合能力.结论 在奥沙利铂诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡过程中,ASPP2的磷酸化状态调节p53的促凋亡功能.
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