【摘 要】
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[目的]建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系.[方法]探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料‘Sugar Baby’,诱导西瓜产生不定根的实验方法.借助该方法,将含有
【机 构】
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中国农业科学院郑州果树研究所,郑州,450009中国农业科学院郑州果树研究所,郑州450009;河南农业大学园艺学院,郑州450002;河南农业大学园艺学院,郑州,450002;
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[目的]建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系.[方法]探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料‘Sugar Baby’,诱导西瓜产生不定根的实验方法.借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,侵染西瓜材料‘Sugar Baby’,通过常规PCR、qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测,评价该过表达体系的效果.[结果]利用野生型和导入外源质粒的发根农杆菌均能成功诱导西瓜‘Sugar Baby’产生不定根.PCR检测结果显示,携带pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper载体的发根农杆菌K599诱导产生的不定根阳性率达到100％.qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测均能成功检测到GUS基因和EGFP基因的过量表达.[结论]利用发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根介导基因过表达的方法,具有周期短,操作方便,转化率高的特点,可实现基因功能的快速验证,为西瓜根系相关基因的功能研究提供技术支持.
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