抗STEAP4多克隆抗体的制备、纯化和鉴定

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目的 制备兔抗人STEAP4多克隆抗体及其特性鉴定.方法 应用DNAStar软件对STEAP4的蛋白序列进行分析,选择STEAP4基因编码蛋白的近N端序列合成多肽并与牛血清白蛋白(BSA)交联.以纯化的STEAP4免疫新西兰白兔,制备抗STEAP4蛋白多抗,间接ELISA检测兔血清效价,Western blot和免疫组织化学法鉴定多抗的特异性.结果 得到兔抗人STEAP4多肽抗体,效价达1:6 000.ELISA及蛋白印迹证实兔抗人STEAP4抗体町特异性识别STEAP4多肽.Westem blot结果显示该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为52 000.以一抗采用STEAP4多克隆抗体的脂肪组织石蜡切片为检测标本,进行STEAP4组织定位研究,发现STEAP4蛋白表达于脂肪细胞膜;以上结果皆与STEAP4的生物信息学分析一致.结论 成功制备了抗STEAP4多克隆抗体,制备的兔抗人STEAP4合成肽抗体可应用于Western blot和免疫组织化学试验,为后续深入研究STEAP4蛋白的功能奠定了基础.
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