SN50定向诱导小鼠小胶质细胞分化促进缺氧损伤神经元修复的实验研究

来源 :中国修复重建外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zisanjie
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目的 探讨SN50定向诱导小鼠小胶质细胞分化对缺氧损伤神经元的修复作用及其机制.方法 取新生BALB/c小鼠脑组织,采用差速贴壁结合震荡方法分离神经元和小胶质细胞.小胶质细胞首先采用免疫荧光染色鉴定特异性表达蛋白诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthetase,iNOS)和电离钙离子结合调节因子1 (ionized calcium binding adapter molecule 1,Ibal)表达情况,实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测特异性表达基因iNOS、CD32和IL-10;然后采用SN50处理后,Western blot检测SN50对小胶质细胞NF-κB的调控,qRT-PCR检测小胶质细胞相关分化基因(iNOS、CD11b、IL-10、CD206)表达,流式细胞术检测SN50对小胶质细胞凋亡的影响,以上检测均以蒸馏水处理的小胶质细胞作为对照.神经元首先行缺氧损伤处理,分别于缺氧处理0、2、6、12、24、48 h后MTT检测神经元活力,另取缺氧处理12h神经元经Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的表达、流式细胞术检测神经元凋亡情况.最后,将缺氧损伤12h神经元分别与无菌蒸馏水(对照组)和SN50(实验组)处理的小胶质细胞共培养24 h,MTT检测细胞活力、Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3)表达、流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 免疫荧光染色和qRT-PCR鉴定震荡分离的细胞表达小胶质细胞特异性蛋白和基因.与正常小胶质细胞相比,SN50处理小胶质细胞后NF-κB蛋白及指示向M1型分化特异性基因iNOS、CDllb相对表达量降低(P<0.05),向M2型分化特异性基因IL-10和CD206相对表达量提高(P<0.05),但细胞凋亡率无明显改变(P>0.05).与正常神经元相比,神经元缺氧处理后活力显著下降,Bcl-2、Caspase-3蛋白相对表达量降低,而cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量提高,神经元凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).小胶质细胞与神经元共培养后,与对照组相比,实验组细胞活力及Bcl-2、Caspase-3蛋白相对表达量明显升高,cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量以及细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 SN50可以通过NF-κB信号通路诱导小胶质细胞向M2型分化,使小胶质细胞对缺氧受损神经元发挥修复作用.
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