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目的
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)作为免疫佐剂，能够影响犬透明带3(CZP3) DNA疫苗的免疫效果，有助于研制有效降低流浪犬生育的犬透明带3 DNA疫苗。
方法采用RT-PCR和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法，分析GM-CSF对小鼠肌肉注射部位的抗原提呈细胞(antigen presenting cells，APCs)成熟和富集的影响。然后通过电脉冲刺激小鼠肌肉，将分子佐剂pcDNA3-GM-CSF与DNA疫苗pcDNA3-CZP3单独或联合免疫接种雌性BALB/c小鼠。ELISA方法检测了小鼠血清和生殖道中抗体IgG和sIgA(secretary IgA)的水平以及血清中IL-4和IFN-γ的含量，MTT方法检测小鼠脾脏T细胞的增殖，间接免疫荧光验证血清中CZP3抗体与小鼠卵细胞结合的能力，抗生育实验分析免疫不育效果。
结果GM-CSF与pcDNA3-CZP3共免疫小鼠能够显著促进CD80、CD83和CD86的表达，促进pcDNA3-CZP3免疫接种小鼠血清中IgG和生殖道中sIgA抗体水平的显著升高(P<0.01)。免疫小鼠的IL-4和IFN-γ的含量均显著增加(P<0.05)，MTT法证明脾脏T细胞增殖显著(P<0.05)，间接免疫荧光结果表明小鼠卵细胞表面的荧光强度和致密度与免疫组血清中抗体的水平成正相关，抗生育实验表明GM-CSF显著性(P<0.05)地降低DNA疫苗pcDNA3-CZP3免疫小鼠的产仔数目。
结论GM-CSF作为免疫佐剂能够显著增强犬透明带3 DNA疫苗的免疫不育效果，可以作为增强犬透明带3 DNA免疫不孕疫苗的有效佐剂。