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目的
探讨黄芪甲苷(AST)逆转HepG2/GCS细胞的多药耐药及其机制。
方法用重组葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)质粒及空质粒转染HepG2肝癌细胞，反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western blot)分析GCS以及多药耐药(MDR)基因的表达。GCS转染组、空白载体组和空白对照组行AST细胞毒性实验和阿霉素(ADM)体外肿瘤细胞抑制实验，GCS转染组药物干预后行Hoechst 33258染色。流式细胞术检测各组细胞凋亡率，Western blot检测各组Caspase-9、Caspase-3、Bax、Bcl-2表达。
结果荧光显微镜观察到GCS转染高表达。RT-PCR以及Western blot显示，GCS转染组GCS和MDR1的相对表达明显高于空白载体组，差异有统计学意义(P<0.05)。AST对各组细胞无明显毒性。空白对照组、空白载体组和GCS转染组ADM的50%细胞抑制浓度分别为10 μg/ml、10 μg/ml、15 μg/ml。Hoechst 33258和流式细胞术检测表明，GCS转染组、ADM＋GCS转染组、ADM＋AST＋GCS转染组凋亡率呈升高趋势，凋亡率分别为(2.68±0.20)%比(32.66±1.84)%和(32.66±1.84)%比(64.29±1.94)%，差异有统计学意义(P<0.05)。ADM＋AST＋GCS转染组的Caspase-9、Caspase-3、Bax相对表达均高于ADM＋GCS转染组，Bcl-2相对表达低于ADM＋GCS转染组，差异有统计学意义(P<0.05)。
结论AST可逆转HepG2/GCS细胞多药耐药，增强其对ADM的敏感性，通过Caspase途径和Bax途径促进肿瘤细胞凋亡。