【摘 要】
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目的 建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法 并进行初步应用.方
【机 构】
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同济大学附属东方医院检验科,上海,200120;复旦大学环境科学与工程系,上海,200438
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目的 建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法 并进行初步应用.方法 基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法 并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系.结果 8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89％)高于培养法(42.20％),差异有统计学意义(χ2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15％、100％、65.25％,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95％(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817).结论 与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法 .
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