【摘 要】
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目的 构建真核表达载体pEGFP-RIPX,并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位,并检测外源性RIPX的表达.方法 以pBluescriptR–RIPX为模板,采用PCR 法进行人RIPX 编码序列(ORF)的扩增,并
【机 构】
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中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室
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目的 构建真核表达载体pEGFP-RIPX,并鉴定RIPX在胃癌细胞中的定位,并检测外源性RIPX的表达.方法 以pBluescriptR–RIPX为模板,采用PCR 法进行人RIPX 编码序列(ORF)的扩增,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1中.将pEGFP-RIPX质粒瞬时转染到胃癌SGC-7901细胞中,用Western印迹方法 检测GFP-RIPX融合蛋白的表达;用激光扫描共聚焦显微镜观察RIPX的定位.结果 人的RIPX 编码序列被成功克隆至真核表达载体pEGFP-C1中;证实了GFP-RIPX融合蛋白的表达;转染pEGFP-RIPX 后,在胃癌SGC-7901 细胞胞质内可见明亮的绿色荧光.结论 成功地构建了pEGFP-RIPX 载体,鉴定了外源性RIPX 的表达;同时证实在胃癌SGC-7901 细胞中RIPX主要定位于细胞质,为进一步研究RIPX 的生物学特性及其信号转导通路奠定了基础.
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