论文部分内容阅读
摘要：比较了冰醋酸和巴豆油两种试剂用于小鼠痔疮模型构建的效果，用地龙商路药膏对痔疮模型小鼠进行治疗。结果显示使用99%浓度冰醋酸建立小鼠痔疮模型，效果差异不大;商陆与地龙质量比为4： 1时，治疗痔疮模型小鼠效果最佳。
关键词：小鼠痔疮模型;商陆;地龙
痔疮动物模型的构建方法中，醋酸法、巴豆油法、细菌法等，其中因醋酸法、巴豆油法操作简单，被广泛使用[1]。地龙在民间应用于治疗痔疮具有特效[2]，商陆别名“见肿消”，其性寒，味苦，有毒;有治毒瘡、通二便、消水肿的功效[3]。在此，对不同的小鼠痔疮模型构建方法进行了比较，同时，采用商路和地龙熬制的药膏对痔疮模型小鼠进行了治疗效果评估，目的是为痔疮模型小鼠的构建和治疗药物开发提供一定的实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 SPF级昆明鼠，体重30g（±5）;华中农业大学提供，生产许可证号：SCXK（鄂）2015-0019。
1.1.2 实验药材 商陆、地龙。
1.2 实验仪器和试剂
1.2.1 实验仪器 粉碎机;电热鼓风干燥箱;电子天平;旋转蒸发器;集热式恒温加热磁力搅拌器;体视镜;循环水式多用真空泵;高速冷冻离心机;恒温水浴锅。
1.2.2 实验试剂 HAc、盐酸、无水乙醚、无水乙醇、十八醇、单硬脂酸甘油酯、液体石蜡、三乙醇胺、白凡士林、甘油、SDS、NaCl;巴豆油;马应龙麝香痔疮膏。
1.3 实验方法
1.3.1 使用冰醋酸建小鼠痔疮模型
体重规格30g（±5）的小白鼠，分4组（10只/组），分别用99%、75%、50%、25%浓度冰醋酸浸润直径为0.5cm的圆形滤纸片，贴于小鼠肛周，30秒后重复用药一次，以生理盐水作空白对照，48h后进行建模效果评价。
1.3.2 使用巴豆油建小鼠痔疮模型
10mL巴豆油加无水乙醚90mL，搅拌均匀后，用棉签蘸取，插入小鼠肛门约20mm处，保持30s，同时慢速捻转5圈，建立小鼠肛门巴豆油肿胀模型。以生理盐水作空白对照，6小时后检查建模效果。
1.3.3 建模效果评价方法
以上述方式建模6组小鼠，将小鼠颈椎脱臼处死，切下其肛门直肠1.5cm左右，将所切部分称湿重后，在烘干16h称干重，计算小鼠肛门炎症程度，其中干湿重均取平均值。
1.3.4 地龙商陆软膏的制备
将商陆和地龙烘干至恒重后粉碎，称取15g于烧杯中混合均匀，其中商陆与地龙的质量比分别为1：4、4：1、3：2、2：3、1：1，用85%的乙醇300mL加热冷凝回流2h，抽滤滤液并减压蒸馏浓缩至浸膏状。用十八醇1.0g、单硬脂酸甘油酯0.5g、液体石蜡1.0g、三乙醇胺0.22g、白凡士林1.0g、SDS 0.2g、甘油1.0g、蒸馏水5.0g，加热搅拌成药膏基质，每克基质中分别加入0.0g、0.1g、0.5g、1.0g地龙商陆浸膏，研磨均匀后即得地龙商陆软膏。
1.3.5痔疮模型小鼠的治疗
随机选取以上由99%冰醋酸方法构建的小鼠痔疮模型，分为8组（10只/组），其中5组用含不同质量比的商陆、地龙制成的软膏进行肛周涂抹给药，商陆与地龙的质量比为1：4的为治疗组1，4：1的为治疗组2，3：2为治疗组3，2：3为治疗组4，1：1为治疗组5，以未加浸膏的软膏基质作空白组，马应龙痔疮膏给药组为阳性对照组，不给任何药物治疗组为模型组，1次给药0.5g，1天2次，连续给药7天后第8天观察药效。
1.3.6 痔疮模型小鼠治疗效果评价标准参考文献：[4]。
2 结果
2.1 不同方法建模后炎症程度结果
巴豆油和冰醋酸造模后，小鼠肛周炎症明显加重，计算结果显示巴豆油和99%冰醋酸的促炎作用差异不大，但从干湿重数据上看，醋酸的促炎效果略强，随着醋酸浓度下降，炎症程度也相应下降。
2.2 地龙商陆软膏对痔疮小鼠的治疗效果
1：1、3：2和4：1的痔疮药膏均有助于小鼠肛周溃烂愈合，商陆与地龙的质量比为4：1时效果最好，按该比例配制的痔疮软膏使肛周溃疡第Ⅲ等级的小鼠痔疮模型均愈合至Ⅱ等级，Ⅱ等级和Ⅰ等级的小鼠痔疮模型基本治愈。
3结论
高浓度冰醋酸和巴豆油建模效果区别不大，可以根据实际情况采用不同建模方法。
商陆与地龙合用，当商陆的使用质量大于地龙时，能有效消除痔疮模型小鼠的溃疡和红肿，具有良好的应用开发价值。
参考文献：
[1]马宗国，江南，余梦瑶，等. 痔疮动物模型的研究进展[J]. 中国实验动物学报，2010，18（5）：446-450.
[2]梁韶明，周春艳. 蛐蟮治疗痔疮72例[J]. 中国民间疗法，2006，14（12）：63.
[3]国家药典委员会 . 中国药典 [M]. 一部 .2015.
[4]韩向晖，陆金根，曹永清，等.复黄片防治痔疮的药效学研究[J]. 上海中医药大学学报，2008，22（5）：59-62.
基金项目：武汉东湖学院2019年度“东湖未来之星”大学生科研基金项目;武汉东湖学院2019年校级大学生创新创业训练计划项目（xc2019079）.
作者简介：金卫华（1976-），男，讲师，硕士，研究方向：生物制药。
武汉东湖学院 湖北 武汉 430212
关键词：小鼠痔疮模型;商陆;地龙
痔疮动物模型的构建方法中，醋酸法、巴豆油法、细菌法等，其中因醋酸法、巴豆油法操作简单，被广泛使用[1]。地龙在民间应用于治疗痔疮具有特效[2]，商陆别名“见肿消”，其性寒，味苦，有毒;有治毒瘡、通二便、消水肿的功效[3]。在此，对不同的小鼠痔疮模型构建方法进行了比较，同时，采用商路和地龙熬制的药膏对痔疮模型小鼠进行了治疗效果评估，目的是为痔疮模型小鼠的构建和治疗药物开发提供一定的实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 实验动物 SPF级昆明鼠，体重30g（±5）;华中农业大学提供，生产许可证号：SCXK（鄂）2015-0019。
1.1.2 实验药材 商陆、地龙。
1.2 实验仪器和试剂
1.2.1 实验仪器 粉碎机;电热鼓风干燥箱;电子天平;旋转蒸发器;集热式恒温加热磁力搅拌器;体视镜;循环水式多用真空泵;高速冷冻离心机;恒温水浴锅。
1.2.2 实验试剂 HAc、盐酸、无水乙醚、无水乙醇、十八醇、单硬脂酸甘油酯、液体石蜡、三乙醇胺、白凡士林、甘油、SDS、NaCl;巴豆油;马应龙麝香痔疮膏。
1.3 实验方法
1.3.1 使用冰醋酸建小鼠痔疮模型
体重规格30g（±5）的小白鼠，分4组（10只/组），分别用99%、75%、50%、25%浓度冰醋酸浸润直径为0.5cm的圆形滤纸片，贴于小鼠肛周，30秒后重复用药一次，以生理盐水作空白对照，48h后进行建模效果评价。
1.3.2 使用巴豆油建小鼠痔疮模型
10mL巴豆油加无水乙醚90mL，搅拌均匀后，用棉签蘸取，插入小鼠肛门约20mm处，保持30s，同时慢速捻转5圈，建立小鼠肛门巴豆油肿胀模型。以生理盐水作空白对照，6小时后检查建模效果。
1.3.3 建模效果评价方法
以上述方式建模6组小鼠，将小鼠颈椎脱臼处死，切下其肛门直肠1.5cm左右，将所切部分称湿重后，在烘干16h称干重，计算小鼠肛门炎症程度，其中干湿重均取平均值。
1.3.4 地龙商陆软膏的制备
将商陆和地龙烘干至恒重后粉碎，称取15g于烧杯中混合均匀，其中商陆与地龙的质量比分别为1：4、4：1、3：2、2：3、1：1，用85%的乙醇300mL加热冷凝回流2h，抽滤滤液并减压蒸馏浓缩至浸膏状。用十八醇1.0g、单硬脂酸甘油酯0.5g、液体石蜡1.0g、三乙醇胺0.22g、白凡士林1.0g、SDS 0.2g、甘油1.0g、蒸馏水5.0g，加热搅拌成药膏基质，每克基质中分别加入0.0g、0.1g、0.5g、1.0g地龙商陆浸膏，研磨均匀后即得地龙商陆软膏。
1.3.5痔疮模型小鼠的治疗
随机选取以上由99%冰醋酸方法构建的小鼠痔疮模型，分为8组（10只/组），其中5组用含不同质量比的商陆、地龙制成的软膏进行肛周涂抹给药，商陆与地龙的质量比为1：4的为治疗组1，4：1的为治疗组2，3：2为治疗组3，2：3为治疗组4，1：1为治疗组5，以未加浸膏的软膏基质作空白组，马应龙痔疮膏给药组为阳性对照组，不给任何药物治疗组为模型组，1次给药0.5g，1天2次，连续给药7天后第8天观察药效。
1.3.6 痔疮模型小鼠治疗效果评价标准参考文献：[4]。
2 结果
2.1 不同方法建模后炎症程度结果
巴豆油和冰醋酸造模后，小鼠肛周炎症明显加重，计算结果显示巴豆油和99%冰醋酸的促炎作用差异不大，但从干湿重数据上看，醋酸的促炎效果略强，随着醋酸浓度下降，炎症程度也相应下降。
2.2 地龙商陆软膏对痔疮小鼠的治疗效果
1：1、3：2和4：1的痔疮药膏均有助于小鼠肛周溃烂愈合，商陆与地龙的质量比为4：1时效果最好，按该比例配制的痔疮软膏使肛周溃疡第Ⅲ等级的小鼠痔疮模型均愈合至Ⅱ等级，Ⅱ等级和Ⅰ等级的小鼠痔疮模型基本治愈。
3结论
高浓度冰醋酸和巴豆油建模效果区别不大，可以根据实际情况采用不同建模方法。
商陆与地龙合用，当商陆的使用质量大于地龙时，能有效消除痔疮模型小鼠的溃疡和红肿，具有良好的应用开发价值。
参考文献：
[1]马宗国，江南，余梦瑶，等. 痔疮动物模型的研究进展[J]. 中国实验动物学报，2010，18（5）：446-450.
[2]梁韶明，周春艳. 蛐蟮治疗痔疮72例[J]. 中国民间疗法，2006，14（12）：63.
[3]国家药典委员会 . 中国药典 [M]. 一部 .2015.
[4]韩向晖，陆金根，曹永清，等.复黄片防治痔疮的药效学研究[J]. 上海中医药大学学报，2008，22（5）：59-62.
基金项目：武汉东湖学院2019年度“东湖未来之星”大学生科研基金项目;武汉东湖学院2019年校级大学生创新创业训练计划项目（xc2019079）.
作者简介：金卫华（1976-），男，讲师，硕士，研究方向：生物制药。
武汉东湖学院 湖北 武汉 430212