为准确测定小鼠血液中4-(N-甲基-N-亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)及其代谢物,了解小鼠体内NNK的代谢途径,利用Q Exactive轨道阱高分辨质谱仪,建立了一种同时检测C57BL/6小鼠血液中NNK及其7种代谢物[4-(N-甲基-N-亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇(NNAL)、NNK-N-氧化物(NNK-N-oxide)、NNAL-N-氧化物(NNAL-N-oxide)、4-羟基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(HPB)、1-(3-吡啶基)-1,4-二醇(PBD)、1-(3-吡啶基)-1-丁酮-4-羧酸(吡啶基丁酮酸)和1-(3-吡啶基)-1-丁醇-4-羧酸(吡啶基羟基酸)]的液相色谱-高分辨质谱(LC-HRMS)方法。以NNK-d4、NNAL-d3和HPB-d4为内标,小鼠血清样品经乙腈沉淀蛋白后,直接进行亲水相互作用色谱(HILIC)柱分离和质谱分析,质谱扫描模式采用一级全扫描和数据依赖二级扫描(Full MS/dd MS2)模式。结果表明:各目标物的定量限在0.042~0.263 ng/m之间,线性相关系数为0.999 1~1.000 0,加标回收率在89.2%~116.5%之间,日内精密度在1.54%~8.06%之间。该方法选择性好,分析效率高,目标物线性范围大,适合于小鼠血液中NNK及其代谢物检测与分析。