反向PCR克隆黑根霉R306△6-脂肪酸脱饱和酶基因

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利用简并引物扩增出△6-脂肪酸脱饱和酶基因的核心序列,设计与核心序列互补的反向引物,以5’端带磷酸基团的引物进行反转录eDNA,然后在12℃下环化eDNA,并以此作为模板进行反向PCR,引物的延伸方向自核心区向环化分子的未知序列进行,扩增出核心区的上下游序列。应用该方法扩增并测定了黑根霉R306的△6-脂肪酸脱饱和酶基因全序列。并对酶的低温适应机制在氨基酸序列上进行了分析。
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