【摘 要】
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文中研究了以实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)定量细菌和真菌数量的条件,通过比较多对引物的扩增效果,确定分别采用16S rDNA细菌通用引物63F-335R和18S rDNA真菌通用引物0817F-119
【机 构】
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四川省农业科学院蚕业研究所,华南农业大学食品学院,美国英狄士化学公司广州代表处
【基金项目】
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广东省省部产学研合作专项资金项目(2013B090600111);粤港关键领域重点突破项目(2010A020104004);四川省创新能力提升工程项目(No.2016TSCY-006)
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文中研究了以实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)定量细菌和真菌数量的条件,通过比较多对引物的扩增效果,确定分别采用16S rDNA细菌通用引物63F-335R和18S rDNA真菌通用引物0817F-1196R扩增细菌和真菌,并确定退火温度均为60℃。采用多种细菌和真菌对上述条件进行验证,结果显示,无论单一菌种或混合菌种,在上述条件下扩增效率E均在90%~120%范围内,所得标准曲线决定系数R~2>0.98,符合定量要求。用此方法定量鱼露和虾油的微生物,结果显示鱼露发酵过程中细菌数量在3.16×10~4~3.16×10~5个/m L范围内变动,数量远高于真菌数,而且该法测得的细菌和真菌数比平板计数法高1~2个数量级。
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