研究建立一种基于实时荧光定量PCR技术和新型环状引物的简捷、准确、廉价、易于标准化检测乳腺癌组织人表皮生长因子受体2（HER2）基因mRNA表达水平的方法，为临床上肿瘤个性化分子靶向药物治疗提供用药指导。
方法设计HER2和内参基因的新型特异性环状引物，通过Excel在乳腺癌组织标本中随机抽取5份标本检测候选内参基因的表达，同时用geNorm、NormFinder和BestKeeper软件筛选和评估乳腺癌组织中稳定表达的内参基因，设置Mg2+浓度和引物浓度梯度对PCR体系进行优化，建立乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的新型环状引物Eva Green染料实时荧光定量逆转录（FQ RT）-PCR检测方法（以下简称“自建FQ RT-PCR”法），并对其灵敏度、特异性、稳定性进行评价；同时用自建FQ RT-PCR法与免疫组织化学（IHC）法平行检测2008至2012年厦门大学附属中山医院普外科收集的55份乳腺癌组织和其中32份同一患者匹配的正常组织（距癌组织≥5 cm）中HER2基因的表达水平，并评价自建FQ RT-PCR法对乳腺癌的诊断效能。
结果自建FQ RT-PCR法对HER2基因和核糖体蛋白L37a（RPL37A）基因的最低检测限均为101拷贝/μl，线性范围均为101~106拷贝/μl（r=0.997）；HER2和RPL37A基因的高、低浓度标准品(106拷贝/μl和101拷贝/μl) 批内变异系数（CV）分别为(5.93±0.57)%和(5.11±0.59)%、(2.49±0.81)%和(2.98±0.97)%；批间CV为(5.76±0.58)%和(7.71±0.61)%、（3.75±0.76）%和（4.40±0.96）%。FQ RT-PCR法与IHC法平行检测87份乳腺癌组织标本HER2基因表达水平，FQ RT-PCR法的敏感度为96.36%（53/55），特异度为78.13%（25/32），阳性预测值为88.33％（53/60），阴性预测值为92.59％（25/27），与IHC检测结果总符合率为89.66%（78/87）。且与IHC法具有较高的一致性（Kappa=0.770，P＞0.05）。
结论成功建立了FQ RT-PCR检测乳腺癌HER2基因mRNA表达水平的方法，该方法敏感度高、特异度好且快速、价廉，适合临床检验实验室进行肿瘤标本的HER2基因表达检测。（中华检验医学杂志，2012,35：1000-1005）