论文部分内容阅读
目的 探讨肥胖抑制素对高脂诱导的大鼠胰岛β细胞株INS-1凋亡和相关信号通路的影响.方法 将大鼠胰岛β细胞株INS-1分为5%牛血清白蛋白(BSA)组、5%BSA+1 nmol/L肥胖抑制素(OB)组、5%BSA+10 nmol/L OB组、5%BSA+100 nmol/LOB组、5%BSA+500 nmol/L OB组、0.5 mmol/L棕榈酸(PA)组、0.5 mmol/L PA+1 nmol/L OB组、0.5 mmol/LPA+10 nmol/L OB组、0.5 mmol/L PA+100 nmol/L OB组、0.5 mmol/L PA+500 nmol/L OB组,应用细胞计数试剂盒检测各组细胞存活率.另将INS-1细胞分为5%BSA组、100 nmol/L OB组、50 μmol/L LY294002组、0.5mmol/L PA组、0.5 mmol/L PA+50 μmol/L LY294002组、0.5 mmol/L PA+100 nmol/L OB组、0.5mmol/L PA+100 nmol/L OB+50 μmol/L LY294002组,应用膜连蛋白V/碘化丙啶双染方法检测各组细胞凋亡率.最后,将INS-1细胞分为5%BSA组、0.5 mmol/L PA+100 nmol/L OB 0 min组、0.5mmol/L PA+100 nmol/L OB 15 min组、0.5 mmol/L PA+100 nmol/LOB 30 min组、0.5 mmol/L PA+100 nmol/L OB 60 min组,应用Westen blot法检测各组细胞蛋白激酶B(Ser473)磷酸化水平.应用单因素方差分析进行组间比较.结果 无PA干预时,OB剂量依赖性地促进细胞存活;与5%BSA组相比,5%BSA+100 nmol/L OB组细胞存活率增加36%.PA干预后,0.5 mmol/L PA组细胞存活率较5%BSA组下降35%.OB剂量依赖性地阻上PA诱导的脂毒性,与0.5 mmol/L PA组相比,0.5 mmol/LPA+10 nmol/L OB组细胞存活率增加23%,0.5 mmol/L PA+100 nmol/LOB组增加35%.0.5mmol/L PA组细胞凋亡率为26%,明显高于5%BSA组.加用100 nmol/L OB后,细胞凋亡率下降15%.0.5 mmol/L PA+100 nmol/L OB 30 min组、0.5 mmol/L PA+100 nmol/L OB组磷酸化蛋白激酶B表达水平较高.加用LY294002后磷酸化蛋白激酶B表达明显受抑制,细胞凋亡率增加至20%.结论 OB抑制高脂诱导的胰岛β细胞凋亡,可能与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路有关.