【摘 要】
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目的:回复基因克隆过程中的异常点突变,重新表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)单链抗体基因(V11),恢复其抗原结合能力.方法:通过逆转录及多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增抗人VEGF
【机 构】
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四川省人民医院口腔颌面外科,四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科
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目的:回复基因克隆过程中的异常点突变,重新表达抗人血管内皮生长因子(VEGF)单链抗体基因(V11),恢复其抗原结合能力.方法:通过逆转录及多聚酶链式反应(RT-PCR),扩增抗人VEGF单克隆抗体(E11)的可变区基因片段,构建表达载体pET-15b(含E-tag).将V11轻、重链可变区基因序列(V11L、V11H)与其所属亚组共同序列和一致序列进行联配比较,发现异常氨基酸并分析其性质,确定异常突变点.PCR定点回复突变,重新表达单链抗体基因(V11m), ELISA检测表达产物与VEGF165的结合
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