【摘 要】
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目的基于噬菌体展示随机环七肽库,通过亲和筛选获得结核分枝杆菌(MTB)环七肽配体分子,初步鉴定其与分枝杆菌的结合能力,以优化纳米检测。方法以MTB标准株H37Rv灭活菌体为靶分子,卡介苗(BCG)为反筛分子,对噬菌体展示随机环七肽文库进行筛选。4轮淘选后,挑选H37Rv和BCG洗脱单噬菌体进行测序,ELISA检测单噬菌体与其亲和力。将高亲和力单噬菌体所展示环肽进行体外合成,并标记荧光,荧光显微镜与
【机 构】
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200433同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病(肺)重点实验室,200433同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病(肺)重点实验室,200433同济大学附属上海市肺科医院上海市结核病(肺)重点实验
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目的基于噬菌体展示随机环七肽库,通过亲和筛选获得结核分枝杆菌(MTB)环七肽配体分子,初步鉴定其与分枝杆菌的结合能力,以优化纳米检测。
方法以MTB标准株H37Rv灭活菌体为靶分子,卡介苗(BCG)为反筛分子,对噬菌体展示随机环七肽文库进行筛选。4轮淘选后,挑选H37Rv和BCG洗脱单噬菌体进行测序,ELISA检测单噬菌体与其亲和力。将高亲和力单噬菌体所展示环肽进行体外合成,并标记荧光,荧光显微镜与流式细胞仪检测合成环肽的结合活性,并与前期获得的线性结合肽进行比较。
结果经过4轮亲合淘选,能与靶分子结合的噬菌体明显富集。单噬菌体测序共获得16种共同序列。ELISA检测显示,单噬菌体SB1、SB5、SB8、SB26与H37Rv和BCG的亲和力均较高,其吸光度值(A450)与阴性对照吸光度值(A450)比≥2.1,与3种非分枝杆菌不结合,确定为阳性克隆。流式细胞仪检测结果显示,H37Rv与环肽SB1、SB5、SB24、SB26结合的阳性细胞率分别为(73.2±6.3)%、(63.2±5.3)%、(32.9±3.1)%、(89.4±7.0)%;BCG与这4种环肽结合的阳性细胞率分别为(65.6±6.1)%、(48.6±4.5)%、(10.3±1.8)%、(86.6±7.9)%,H37Rv和BCG与4种环肽结合的阳性细胞率均高于H8 [(4.0±1.0)%、 (5.5±1.2)%]。荧光显微镜观察结果显示,环肽SB1、SB5、SB24、SB26荧光肽均与H37Rv发生结合,荧光强度较强,与其他18种分枝杆菌均有一定的亲和力,但荧光强度弱于H37Rv,与3种非分枝杆菌均不结合。
结论本研究以环七肽库替代线性七肽库,成功筛选获得新的MTB配体分子,其与分枝杆菌的亲和力提高。
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