【摘 要】
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融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18.该基因在E.coli Rosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵
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融合基因EGF-IL-18与表达载体pET32a(+)连接构建融合型原核表达质粒pET32a(+)-EGF-IL-18.该基因在E.coli Rosetta(DE3)中获得高效表达,SDS-PAGE分析表明表达产物大部分以包涵体形式存在.以2 mol/L尿素和1%Triton X-100对包涵体进行反复洗涤后,利用离子交换柱层析对包涵体进行柱上复性,结果表明离子交换层析柱上复性不仅能够获得可溶性的EGF-IL-18融合蛋白,而且产物同时得到纯化,纯度大于90%.复性的EGF-IL-18经分子筛进一步纯化后,体外实验证明具有促进人外周血单个核细胞(PBMC)IFN-γ基因表达的能力.该方法简单、高效,为进一步开展EGF-IL-18的动物实验及其大量纯化制备打下基础.
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