【摘 要】
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观察人参-三七-川芎提取物对过氧化氢(H2O2)诱导的内皮细胞衰老SIRT1-自噬通路的影响.该研究以血管内皮细胞作为研究对象,过氧化氢诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白对照组(control),模型组(model)、模型+DMSO组(DMSO),白藜芦醇组(RESV)及人参,三七,川芎提取物低(GNS-L)、中(GNS-M)、高(GNS-H)剂量组,药物干预时间为24h.应用倒置显微镜观察细胞生长状态,透射电子显微镜观察自噬小体的形成,免疫荧光染色观察细胞微管相关蛋白1轻链3β(LC3)的变化,自噬
【机 构】
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中国中医科学院医学实验中心,北京市中医药防治重大疾病基础研究重点实验室,北京100700;中国中医科学院广安门医院,北京100056;中国中医科学院望京医院,北京100102
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观察人参-三七-川芎提取物对过氧化氢(H2O2)诱导的内皮细胞衰老SIRT1-自噬通路的影响.该研究以血管内皮细胞作为研究对象,过氧化氢诱导内皮细胞衰老作为模型,实验分为空白对照组(control),模型组(model)、模型+DMSO组(DMSO),白藜芦醇组(RESV)及人参,三七,川芎提取物低(GNS-L)、中(GNS-M)、高(GNS-H)剂量组,药物干预时间为24h.应用倒置显微镜观察细胞生长状态,透射电子显微镜观察自噬小体的形成,免疫荧光染色观察细胞微管相关蛋白1轻链3β(LC3)的变化,自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)双荧光体系融合蛋白示踪自噬流,单丹磺酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色检测自噬囊泡,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测蛋白沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin 1,SIRT1)、泛素结合蛋白p62及LC3Ⅱ的表达.H2O2造模后,细胞生长速度放慢,细胞贴壁能力下降,SA-β-gal染色蓝染细胞增多,胞质内出现一定数量的双层膜结构的自噬小体及次级溶酶体,自噬流水平略增.给予药物干预后,与模型组相比,各剂量组细胞形态改善,贴壁能力尚可,细胞膜相对完整光滑,SA-β-gal染色蓝染细胞减少,胞质中出现较多自噬小体、自噬空泡及次级溶酶体,自噬溶酶体数量增多,自噬流增加,LC3及MDC染色的荧光强度明显提高,SIRT1及LC3Ⅱ蛋白表达增加,同时p62蛋白表达下调,表明用药后可以提高细胞自噬水平.中药人参,三七-川芎提取物可以延缓血管内皮细胞的衰老,且药物干预后,自噬流及相关蛋白SIRT1、LC3Ⅱ及p62变化明显,自噬水平明显提升,且EX527削弱了中药延缓血管衰老的作用,中药人参-三七-川芎提取物可能通过SIRT1自噬通路延缓血管内皮细胞的衰老.
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