结核分枝杆菌mpt64基因稳定表达细胞系的建立

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【摘要】

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为建立稳定表达结核分枝杆菌分泌蛋白MTP64的P815细胞系,将mpt64基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),构建mpt64真核表达载体.重组质粒酶切鉴定正确后,以Lipofectamine2000转

【作者】

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柏银兰王丽梅杨芳薛莹樊爱琳康健张薇何俊杰徐志凯

【机构】

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第四军医大学基础部微生物学教研室基础部教学实验中心;西京医院放疗科;西京医院检验科,西安,710032;

【出处】

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科学技术与工程

【发表日期】

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2009年8期

【关键词】

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结核分枝杆菌 mpt64 细胞表达

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为建立稳定表达结核分枝杆菌分泌蛋白MTP64的P815细胞系,将mpt64基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-),构建mpt64真核表达载体.重组质粒酶切鉴定正确后,以Lipofectamine2000转染P815细胞,通过G418筛选后,得到阳性克隆,分别以RT-PCR方法检测mRNA表达,间接免疫荧光和Western-blot检测目的蛋白的表达.表达结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的真核表达载体转染细胞后,RT-PCR可扩增出目的基因片段,转染细胞间接免疫荧光检测阳性,Western-blot检测在约26 kDa处有特异显色条带,证实转染细胞表达目的基因.成功地建立mpt64稳定表达细胞系,为进一步结核疫苗评价奠定一定基础.

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