【摘 要】
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目的建立一种基于颜色判定的快速、灵敏、简便的人型支原体环介导等温扩增(LAMP)方法。方法使用PrimerExplorer V5软件设计针对人型支原体MHO2540基因保守区域的4条特异等温扩
【机 构】
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中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 北京大学第一医院皮肤性病科; 海南省皮肤病医院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.81701983,81772154)
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目的建立一种基于颜色判定的快速、灵敏、简便的人型支原体环介导等温扩增(LAMP)方法。方法使用PrimerExplorer V5软件设计针对人型支原体MHO2540基因保守区域的4条特异等温扩增引物,用羟基萘酚蓝(HNB)作为结果判读指示剂并优化体系中dNTPs、MgSO4浓度,建立人型支原体LAMP检测方法,进行灵敏度、特异度等的检测并与普通PCR比较。结果LAMP对标准浓度人型支原体核酸的检测限约为102 CFU,与普通PCR相同,但比实时荧光定量PCR差一个数量级。人型支原体阳性临床标本拷贝数>103 CFU者LAMP阳性率100%,与普通PCR检出率(100%)一致,拷贝数101103 CFU的弱阳性标本LAMP检出率为63.6%(14/22),普通PCR检出率为31.8%(7/22),差异有统计学意义(χ2=4.46,P<0.05)。结论LAMP检测人型支原体敏感、特异且操作简便,可在基层推广应用。
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