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在DNA合成中,合成方向为5'→3',即一条链上是连续复制的,而另一条链的复制是不连续的,必须先合成岗崎片段(真核细胞的岗崎片段为100 bp,原核细胞的为1 000 bp)。DNA连接酶的作用就是催化岗崎片段的连接以完成DNA的合成。另外,DNA连接酶在DNA修复过程中也起重要作用,如在切除修复中,切除损伤的DNA片段,以未受损伤的链作为模板合成一条新的DNA链后,DNA连接酶将新合成的DNA链与原来的DNA链之间的缺口封闭完成DNA的修复。DNA链未封闭的缺口对细胞具有潜在的危险性,所以,DNA连接酶