【摘 要】
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目的 克隆犬圆环病毒(Canine circovirus,CanineCV) ORF3基因,制备ORF3的抗体,为研究ORF3的功能奠定基础. 方法 以CanineCV基因组为模板,PCR扩增编码框ORF3全长序列.将ORF3基
【机 构】
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温州大学病毒学研究所,浙江温州325035;军事兽医研究所;温州大学病毒学研究所,浙江温州,325035;广西动物疫病预防控制中心
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目的 克隆犬圆环病毒(Canine circovirus,CanineCV) ORF3基因,制备ORF3的抗体,为研究ORF3的功能奠定基础. 方法 以CanineCV基因组为模板,PCR扩增编码框ORF3全长序列.将ORF3基因克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组原核表达质粒pET(28a)-ORF3.重组质粒转化入感受态细胞BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组蛋白ORF3,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定. 结果 PCR扩增出CanineCV编码框ORF3片段长度为318 bp.构建的重组质粒pET(28a)-ORF3转化DE3后经IPTG诱导5h,表达分子质量单位(Mr)约为15×103蛋白,与预期相符.Western blot显示重组蛋白能被Anti-His标签抗体识别. 结论 成功构建了pET(28a)-ORF3重组原核表达质粒,并能在大肠杆菌中表达具有免疫反应性的ORF3,为抗ORF3抗体的制备奠定了基础.
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