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目的 研究气道损伤上皮对上皮下成纤维细胞(SEF)转分化为肌纤维母细胞的影响,探讨支气管哮喘(简称哮喘)特征性气道重塑的机制.方法 将气道上皮细胞培养槽与SEF或成纤维细胞胶原凝胶共培养4 d,根据培养槽中人气道上皮细胞株(16HBE)的不同处理方法分为7组.A组:培养槽中无细胞;B组:培养槽中为正常16HBE;C组:培养槽中为机械损伤的16HBE;D组:培养槽中为机械损伤并经细菌脂多糖刺激的16HBE;E组:培养槽中为预先加入内皮素受体A阻断剂BQ123继以机械损伤+细菌脂多糖刺激的16HBE;F组:培养槽中为预先加入转化生长因子β1(TGF-β1)中和抗体继以机械损伤+细菌脂多糖刺激的16HBE;G组:培养槽中为预先加入BQ123与TGF-β1中和抗体继以机械损伤+细菌脂多糖刺激的16HBE.应用免疫荧光、免疫印迹法观察成纤维细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况,测量各组胶原凝胶(每组计数8个样本)的直径变化,以了解转分化的肌纤维母细胞的收缩反应及其上述处理因素的影响;此外,分别选择部分A、B、D组共培养的SEF以16HBE损伤(机械损伤+细菌脂多糖刺激24 h)上清液刺激,观察经共培养诱导转分化的SEF胞内钙离子([Ca2+]i)浓度的动态变化(每组至少分析6个细胞).结果 与其他各组比较,D组SEF表达α-SMA凝胶收缩百分比为[(53±8)%],与B组[(10±10)%]、C组[(24±8)%]、E组[(36±9)%]、F组[(37±3)%]、G组[(31±7)%]比较差异均有统计学意义(F=24.80、38.10,P均＜0.01).共培养的成纤维细胞受16HBE损伤培养上清液刺激后荧光强度增强,D组增加幅度与A、B组比较差异有统计学意义(F=16.60、8.97,P均＜0.01).结论 气道损伤上皮促进SEF转分化为表达α-SMA、具有显著收缩反应能力的肌纤维母细胞;损伤上皮通过释放内皮素1(ET-1)和TGF-β1介导了这种转分化的过程;转分化的肌纤维母细胞在损伤上皮培养上清液刺激下,[Ca2+]i内流增加可能是启动其收缩反应能力增强的早期事件.