白斑综合症杆状病毒(WSBV)PCR检测方法的改进及应用

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斑节对虾Penaeusmonodon白斑综合症是由白斑综合症杆状病毒 (WSBV)所致。患有典型白斑综合症的斑节对虾 ,用两种提取病毒模板DNA的方法 ,进行PCR扩增 :一种是用传统的方法 ,即蛋白酶K ,CTAB等消化 ,酚 /氯仿抽提 ,乙醇沉淀得到DNA ;另一种是用改进的煮沸法提取病毒DNA。对比发现后一种方法稳定性及敏感性比前者高 ,重复性好。用后一种方法对病虾的复眼进行检测 ,PCR结果为阳性。应用后一种方法还对病虾的各组织器官及人工感染的虾进行检测 ,发现病虾中除肝胰腺外 ,附肢、肌肉、心脏、鳃、胃、中肠、神经、复眼、表皮结果均为阳性。感染实验中 ,出现阳性结果注射感染比投喂感染早 ,而且肌肉和附肢较敏感。 Penaeus monodon spotted white spot syndrome is caused by the white spot syndrome baculovirus (WSBV). Penaeus monodon with typical white spot syndromes are subjected to PCR amplification by two methods of extracting viral template DNA: one is digestion by conventional methods, ie, protease K, CTAB, etc., phenol / chloroform extraction, ethanol precipitation Get the DNA; the other is to use the improved boiling method to extract the viral DNA. Comparison found that the latter method of stability and sensitivity than the former, good repeatability. The latter method was used to detect the compound eye of diseased shrimp, and the PCR result was positive. The latter method was also used to detect the shrimp’s tissues and organs and artificially infected shrimp. It was found that appendages, muscles, heart, gills, stomach, midgut, nerves, compound eyes and epidermis Are positive. Infection experiments, the positive results appear to be infected with infected infection earlier, and the muscles and appendages are more sensitive.
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